第二章菌种及扩大培养07课件.pptVIP

第二章 菌种及菌种扩大培养 第一节 微生物工业常用菌种 第二节 种子扩大培养与质量要求 第一节 微生物工业常用的菌种 一、微生物工业对菌种的要求 1、能利用廉价原料，代谢产物高 2、培养发酵条件易控制 3、生长迅速，形成代谢产物速度快，发酵期短 4、满足代谢控制，要大量生产代谢产物 5、能抗噬菌体 6、菌种纯粹，非溶原菌 7、菌种优良，性能稳定 8、不是病原菌，对人体无害。 二、微生物工业常用菌种 1、酒精 对淀粉质原料 （1）南洋5号酵母 （2）南洋混合酵母 （3）K酵母 对糖蜜原料 （1）台湾696（F396）（2）高1－396 （3）古巴Ⅰ号 发酵温度25－28 ℃，PH4.0－4.5 （4）古巴Ⅱ号 发酵温度31－38 ℃，PH3.0－5.0 2、酶制剂生产菌株 （1）糖化酶 AS4309（即Uv－11）发酵温度32℃ PH3.8－4.0 （2）淀粉酶生产菌种 a－淀粉酶：BF7658，杆菌 发酵温度37℃ PH6.7-7.0 3、GA生产菌种 （1）北京棒杆菌 AS1299 最适生长 T＝30－32℃ PH＝6－7.5 （2）钝齿棒杆菌 AS1542 4、抗菌素生产菌种 青霉素 51－20 菌株 由产黄青霉素菌Q－176诱变而得。 3万单位/ml以上。 适宜生长温度25－28 ℃，分泌青霉素20 ℃ 生长PH6.4－6.6 发酵分泌PH6.6－6.9 三、防止菌种衰退的措施 1、菌种衰退的现象 （1）形态上发生变异 （2）生理上发生变异，生长繁殖慢或孢子产生少，生产周期延长 （3）发酵能力弱，糖氮消耗慢 （4）产品得率下降 （5）抗杂菌能力减弱 （6）诱变菌种发生恢复突变 2、菌种衰退的原因 内因：有关基因负突变 外因：菌种保藏方法不妥 （1）菌种生长条件要求没有满足 （2）遇到某些不利条件刺激 （3）传代过程中，没有把正突变传下去，而把负突变传下去 （4）诱变处理的新菌株不稳定 3、防止菌种衰退的措施 （1）做好菌种的保藏工作 A、使菌种在保藏中处于休眠状态，孢子、芽孢。低温、干燥、缺氧、营养缺乏、代谢活动下降。 B、要纯粹，要作无菌检查 C、新鲜的斜面，生长要丰满，取幼龄菌接种 D、接种量要适当，斜面生长不过密 E、保藏培养基，C源比例少，营养贫乏一些，否则产酸，产生代谢产物，引起变异。保藏培养基不加或少加葡萄糖，活化用0.1％葡萄糖 F、尽量减少传代次数 G、培养条件中，营养、温度、水分要合适，稳定。 活化使用培养基要与保藏使用培养基基本相同 （2）定期进行菌种选育工作 A、自然选育 B、诱变育种 第二节 种子扩大培养与质量要求 一、工业微生物的培养类型 静置培养——厌氧性微生物、酒精、乳酸发酵 液体培养：摇瓶培养－种子三角瓶 深层通风培养 浅盘固定培养——米曲 厚层固定培养——厚层通风制曲、酒精、酱油 载体培养（泡沫型料）——色素（红曲霉） 二、种子培养的工艺过程 1、菌体接种法——多用于细菌、酵母菌 原菌种→斜面试管培养→液体试管培养→三角瓶培养→一级种子罐培养→发酵 2、孢子接种法——用于霉菌、放线菌 原菌种→试管斜面培养→茄子瓶培养→孢子悬浮液→一级种子罐→发酵罐发酵 三、种子扩大培养的质量要求 1、种子要纯粹，无杂菌和噬菌体 2、种子要壮 GA菌 V型分裂要多，整齐，代谢旺盛活力强 酒精 酵母要呈圆形或椭圆形，饱满，耗糖快，出芽率20％以上，染色率1％以下，霉菌孢子要丰满，色正常 3、要有足够的菌数 GA生产 104 －109 个/ml O.D净增0.－0.5 酒精 0.8－1亿个 四、影响种子质量的因素 培养基的影响 种龄、种量及培养级数的影响 温度的影响 PH的影响 溶解氧的影响 1、培养基的影响 （1）作孢子培养基 A、基质浓度要低，特别是N源要低，否则不长孢子 B、无机盐浓度要适当，麸皮、小米含有微量元素多，好 C、培养基水量要合适 （2）作为种子培养基 含无机盐、生长素等物质 N丰富，有利于菌体繁殖 C丰富，有利于形成代谢产物，对菌体有反馈抑制作 用，使菌体易衰老 （3）最后一级培养基与发酵培养基趋于一致为好 （4）各级培养基变化不要太大 （5）培养基原料要新鲜，无霉变 （6）水质影响种子质量，不要硬度大，不要污染重 2、种龄、种量及培养级数的影响 （1）种龄：要在对数生长期前期接种 过长：菌种老化，代谢能力下降，生产能力下降 过短：菌种数量不够，适应能力弱，生长慢，发酵时间长，引起污染 （2）种量 接种种子量与发酵液比1:10左右,较大，长得快，发酵周期短，开始占优势，不易染杂