7微生物的生长繁殖.ppt

微生物在自然界中是无处不在的，而且都是混杂地生活在一起的。土壤中就生长有多种大量的微生物。要想研究或利用某一微生物，必须把混杂的微生物类群分离开来，以得到只含有一种微生物的培养。 微生物学中将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。 一、纯培养的分离方法 （一）稀释法 （1）液体稀释法 （2）固体稀释倒平皿法 （二）平皿划线分离法 （三）单细胞挑取法 （四）利用选择培养基分离法 二、微生物生长量的测定方法 （一）测定微生物总数 （1）涂片染色法 （2）比例计数法 （3）细胞的自动计数 （4） 比浊法 二、微生物生长量的测定方法 （二）测定活细菌数 （1）平皿菌落计数法 （2）薄膜过滤计数法 （3）计数器测定法 二、微生物生长量的测定方法 （三）测定细胞或原生质物质的量 （1） DNA 含量测定法 （2）干重法 （3）含氮量测定法 （4）生理指标法 第二节 微生物的生长曲线 微生物的生长和繁殖所导致的群体生长，即表现为细胞数量的增加。 把一定量的细菌接种于一定容积的合适的液体培养基中，在适宜的温度下培养时，它的生长过程具有一定的规律性。 如果以培养时间为横坐标，细胞增加数目的对数（生长速率）为纵坐标，所绘制一条反映细菌从开始生长到死亡的动态过程的曲线称为微生物的生长曲线。 生长曲线反映了典型的微生物群体生长过程的规律，微生物生长规律的研究对工业生产具有重要指导意义。 一、细菌的生长曲线 根据细菌生长繁殖速率的不同，生长曲线可大致分为停滞期、对数期、静止期和衰亡期四个时期。 1 ．停滞期微生物的特点 ① 菌体内物质量显著增加，菌体体积增大，许多杆菌可长成长丝状。 ② 生长速率常数等于零，即每小时的分裂代数等于零。 ③ 细胞内 RNA 尤其是 rRNA 含量增高，原生质呈嗜碱性。 ④ 细胞代谢机能活跃，核糖体、酶类和 ATP 的合成加快，易产生诱导酶，生长速率逐渐加快。 ⑤ 对外界不良条件，例如 NaCI 溶液、浓度、温度和抗生素等化学药物的反应敏感。 2 ．影响停滞期长短的因素 ① 菌种类型 ② 接种龄 ③ 接种量 ④ 培养基的成分 （二）对数期（指数期） 1 ．对数期微生物的特点 ① 生长速率常数达到最大。 ② 细胞生长平衡，菌体内各种成分最为均匀。 ③ 酶系活跃，代谢旺盛，细菌对不良环境因素的抵抗力较强。 2. 影响指数期的因素 ① 菌种种类 ② 营养成分 ③ 营养物浓度 ④ 培养温度 （三）静止期（又称为稳定期或最高生长期） 静止期细菌有以下特点： ① 死亡率和繁殖率相等，细菌处于正增长和负增长相等的动态平衡之中，生长速率等于零； ② 细菌产生量达到最大值，细菌总数最高且保持不变，并维持一段时间； ③ 细菌开始积累储存物质；一些微生物形成荚膜物质，多数芽孢细菌此时形成芽孢。在此时期细菌形态大小典型，生理生化反应相对稳定，所以该期是对某些生长因子如维生素和氨基酸等进行生物测定的必要前提，也是发酵生产中的最佳收获期。 （四）衰亡期 由于静止期时消耗了大量的营养物质，静止期之后，细菌继续培养的话，细菌会因缺乏营养物质而开始利用自身储存的物质进行内源呼吸，即自身溶解，同时，由于细菌在代谢过程中产生的有毒代谢产物抑制细菌生长繁殖，细菌死亡率逐渐增加，死亡数大大超过新生数，群体中活细菌数目急剧下降，出现负增长，此阶段称为衰亡期。其中有一段时间，活细菌数按几何级数急剧下降，故有人称之为“对数衰亡期”。 衰亡期特点： 这一时期的细胞进行内源呼吸，形态多样，例如会产生很多膨大、不规则的退化形态，有的细胞内多液泡，革兰染色反应的阳性菌变成阴性反应，芽抱杆菌形成芽抱，菌体开始自溶，并释放出氨基酸、酶及抗生素等产物。产生衰亡期的原因主要是外界环境对继续生长越来越不利，从而引起细胞内的分解代谢大大超过合成代谢，继而导致菌体死亡。 二、细菌的连续培养 分批培养：将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次收获。 连续培养：一方面连续进料，另一方面又连续出料。 原理：进料=补足营养(“污染物”) 出料=稀释菌浓度、毒物浓度 在连续培养中 ，微生物的生长状态和规律与分批培养中的不同。它们往往处于相当分批培养中生长曲线的某一个生长阶段。 恒化连续培养法尤其适用于污（废）水生物处理。除了序批式间歇曝气器（SBR）法外，其余的污（废）水生物处理法一般均采用恒化连续培养。 遗传是相对的，变异是绝对的。遗传中有变异，变异中有遗传。遗传和变异的辩证关系使微生物不断进化。 工农业生产和污（废）水、有机固体废物生物处理过程中，可利用自然条件或物理、化学因素来促进微生物变异，使它符合生产实践的