UV￣B胁迫下紫花苜蓿qRT￣PCR内参基因的筛选.PDFVIP

－ 　 南京农业大学学报　 ２０１５ꎬ３８(２):２４８ ２５４ ｈｔｔｐ:/ / ｎａｕｘｂ.ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ － 　 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｏｉ:１０.７６８５/ ｊ.ｉｓｓｎ.１０００ ２０３０.２０１５.０２.０１１ － 张薇ꎬ崔为体ꎬ段星亮ꎬ等. ＵＶ￣Ｂ胁迫下紫花苜蓿ｑＲＴ￣ＰＣＲ 内参基因的筛选[Ｊ]. 南京农业大学学报ꎬ２０１５ꎬ３８(２):２４８ ２５４ ＵＶ￣Ｂ胁迫下紫花苜蓿ｑＲＴ￣ＰＣＲ 内参基因的筛选 １ １ １ ２ １ １∗ 张薇 ꎬ崔为体 ꎬ段星亮 ꎬ汪瑾 ꎬ沈文飚 ꎬ谢彦杰 (１ 南京农业大学生命科学学院ꎬ江苏 南京 ２１００９５ꎻ２ 南京农业大学生物学实验教学中心ꎬ江苏 南京 ２１００９５) 摘要:[目的]在植物代谢通路关键调控基因表达的相关研究中ꎬ筛选各种条件下合适的内参基因至关重要ꎮ [方法]以ＵＶ￣Ｂ 为主要胁迫ꎬ运用荧光定量ＰＣＲ技术以及ｇｅＮｏｒｍ和ＮｏｒｍＦｉｎｄｅｒ 软件ꎬ对不同取样时间(处理后０、１、２和５ ｄ)的紫花苜蓿 (Ｍｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａ Ｌ.)幼苗根、茎、叶组织中Ａｃｔｉｎ２、ＧＡＰＤＨ、ＭＳＣ２７、１８Ｓ ＲＮＡ、β￣ｔｕｂｌｉｎ、ｂＺＩＰ、ＵＢＱ、ＰＰＰｒｅｐ、Ｍｓ０３＿５０ｆ０３ 和Ｍｓ０３＿ ６９ｆ０７等候选内参基因表达的稳定性进行研究ꎮ [结果]ｇｅＮｏｒｍ软件显示:紫花苜蓿幼苗根部ＵＶ￣Ｂ胁迫下ＭＳＣ２７和ＵＢＱ 的 稳定值(Ｍ)较小ꎬ增加第３个内参基因后变异值(Ｖ)基本不变ꎬ表明选用２个内参基因即可ꎻ茎部则是ＭＳＣ２７和Ａｃｔｉｎ２ 的Ｍ值 较小ꎬ同时相应的Ｖ值也满足要求ꎻ而使用Ｍ值较小的Ａｃｔｉｎ２和ＧＡＰＤＨ为内参ꎬ在研究叶片基因表达时可以获得更加准确的 结果ꎬ当增加第３个内参基因时ꎬＶ值变大ꎬ反而影响结果ꎮ 同时发现ꎬ１８Ｓ ＲＮＡ 和β￣ｔｕｂｌｉｎ在根和茎叶中的稳定性均较差ꎬ因 此不适宜作为内参基因使用ꎮ ＮｏｒｍＦｉｎｄｅｒ 的结果与上述结果相似ꎬ结果差异部分的原因可能是因为算法不同ꎮ [结论]在 ＵＶ￣Ｂ胁迫下ꎬ紫花苜蓿幼苗根部中ＭＳＣ２７和 ＵＢＱ 的表达较为稳定ꎬ而在茎部则以ＭＳＣ２７和Ａｃｔｉｎ２ 为宜ꎬ使用Ａｃｔｉｎ２ 和 ＧＡＰＤＨ为内参在研究叶片基因表达时可以获得更加准确的结果ꎮ 本研究对ＵＶ￣Ｂ胁迫下紫花苜蓿中关键基因的定量表达分 析具有重要的实用价值ꎮ 关键词:紫花苜蓿ꎻ实时荧光定量ＰＣＲꎻ内参基因ꎻｇｅＮｏｒｍꎻＮｏｒｍＦｉｎｄｅｒ － － － 中图分类号:Ｑ７８１　 　 　 　 文献标志码:Ａ　 　 　 　 文章编号:１０００ ２０３０(２０１５)０２ ０２４８ ０７ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｇｅｎｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｑＲＴ￣ＰＣＲ ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ａｌ