第三章 细胞培养基本技术.pdf

第三章细胞培养基本技术 况海斌Ph.D 南昌大学医学院生理学教研室 计划生育生殖内分泌研究室 讲解的主要内容： 内容： 细胞培养的一些专业术语介绍（如细胞株、系，上皮细 胞型、成纤维细胞型）. 原代细胞分离、培养（酶消化法和组织块培养法）。 细胞生长状况的观察。 培养细胞一代生长过程。 传代。 冻存与复苏。 细胞培养注意事项（如细胞污染）。 第一节、细胞培养中的常用术语： 1.组织培养(Tissue Culture)： 指的是从体内取出组 织，在模拟体内生理环境，使之生存和生长并维持其 结构和功能的方法。 2.器官培养（Organ Culture）： 培养的是器官的原 基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生 长和保持一定功能的方法。 3.细胞培养(Cell Culture)： 培养物是单个细胞和细 胞群。 4、*原代培养（primary culture）：从 体内取出细胞或组织的第一次培养。 5、*传代（passage）也称再培养，无论 是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或 移植到另一个培养瓶即称为传代或传代 培养。 6、*细胞系（cell line）：原代培养物 经首次传代成功后即为细胞系。 7、亚系（sub－line）：由原细胞系分离出的 具有与原细胞系不同性状的细胞系。 8、有限细胞系（finite cell line）：细胞 系形成后仅能维持有限传代次数，最后死亡。 9、连续或无限细胞系（continuous cell line or infinite cell line）：具有无限繁 殖能力（获得不死性：immortality）和能反 复进行传代细胞系。 如，早孕胎盘来源的正常细胞滋养层细胞 系（如转染端粒酶－－NPC细胞系） 10、*细胞株（cell strain）：通过选 择法或克隆形成法从原代培养物或细胞 系中获得的具有特殊性质或标志的培养 物称细胞株。 11、亚株（sub－strain）：由原细胞株 分离出的具有原株性状不同的细胞株。 12、体外培养转化（in vitro transformation）：细胞在体外培养中 发生与原细胞遗传性状不同的变化，但 不一定具有致癌性。 13、汇合（confluent）：细胞相互连接 成片占据所有底物面积。 14、接触抑制（contact inhibition）：细胞汇合相互接触后失 去运动的现象。 15*克隆（clone）：由单个细胞通过有丝分裂形成的 细胞群体。 16、克隆形成率（cloning effeciency）：向底物接 种单细胞悬液能形成细胞小群的百分数。 表皮干细胞：先做其饲养层 第二节 细胞原代培养 原代培养也叫初代培养，是从供体取得 组织细胞后在体外进行的首次培养。 原代培养组织或细胞的特点： 1．组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生 很大变化，仍具有二倍体遗传性，最接近和反 映体内生长特性，是药物测试、细胞分化等实 验的很好对象； 2. 缺点是成分组成比较复杂，因而原代培养细 胞部分生物学特征尚不稳定，如要做较为严格 的对比性实验研究，还需对细胞进行短期传代 后进行。 一、原代培养的方法 (一)、消化培养法 (二) 、组织块培养法 （三）、其它（如机械方法） (一)、消化培养法 1、培养前的准备 培养用品的消毒 根据所要进行的具体培养对象如组织块贴壁原代培养、末梢 血白细胞培养、传代培养等，准备培养所需器械和物品，清 点无误后进行清洗、包装和消毒灭菌。 培养室的消毒 培养室每天用0.2%的新洁尔灭或2%~5%的来苏儿拖洗地 面一次（拖布专用），30瓦紫外灯管照射消毒30~50分 钟。 超净工作台的消毒 2、无菌培养操作注意事项： （为保证无菌，除