质谱联用仪的原理.pptVIP

液相色谱／质谱联用主要解决如下几方面的问题： ①不挥发性化合物分析测定； ②极性化合物的分析测定； ③热不稳定化合物的分析测定； ④大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等）的分析测定； LC-MS分析条件的选择和优化 1.接口的选择： ESI适合于中等极性到强极性的化合物分子，特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子（如蛋白质） APCI不适合可带多个电荷的大分子，其优势在于弱极性或中等极性的小分子的分析。 2.正、负离子模式的选择： 　选择的一般原则为： 正离子模式：适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。 负离子模式：适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较多的强伏电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式。 3.流动相的选择 常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液，如甲酸铵、乙酸铵等，还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水等调节pH值。 LC／MS接口避免进入不挥发的缓冲液，避免含磷和氯的缓冲液，含钠和钾的成分必须＜lmmol/l。（盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器）含甲酸（或乙酸）＜2％。含三氟乙酸≤0.5％。含三乙胺＜l％。含醋酸铵＜10一5 mmol/l。 送样前一定要摸好LC条件，能够基本分离，缓冲体系符合MS要求。 4.流量和色谱柱的选择 不加热ESI的最佳流速是1—50ul／min，应用4.6 mm内径LC柱时要求柱后分流，目前大多采用 l—2.1 mm内径的微柱，TIS源最高允许lml／min，建议使用200—400ul／min APCI的最佳流速～lml／min，常规的直径4.6mm柱最合适。 为了提高分析效率，常采用＜ 100 mm的短柱（此时UV图上并不能获得完全分离，由于质谱定量分析时使用MRM的功能，所以不要求各组分没有完全分离）。这对于大批量定量分析可以节省大量的时间。 5.辅助气体流量和温度的选择 雾化气对流出液形成喷雾有影响，干燥气影响喷雾去溶剂效果，碰撞气影响二级质谱的产生。 操作中温度的选择和优化主要是指接口的干燥气体而言，一般情况下选择干燥气温度高于分析物的沸点20℃ 左右即可。对热不稳定性化合物，要选用更低的温度以避免显著的分解。 选用干燥气温度和流量大小时还要考虑流动相的组成，有机溶剂比例高时可采用适当低的温度和流量小一点的。 * * L/O/G/O 液相色谱-质谱联用 的原理及应用 第三组：乐晓洁 余鸿婷 陈兰平 郑立伟 色谱-质谱联用 色谱的分离能力 质谱的定性功能 实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。而且也简化了样品的前处理过程，使样品分析更简便。 色谱-质谱联用 真空系统Vacuum System 检测器Detector 数据处理系统Data System 质量分析器Mass Analyser 离子源Ionization Source 液相色谱／质谱联用技术 进样 系统Sample Inlet LCMS 接口 液相色谱／质谱联用的基本流程为：混合的样品经高效液相色谱柱分离后成为多个单一组分，依次通过液相色谱／质谱接口进入质谱仪的离子源，离子化后的样品经过质量分析器分析后由检测系统记录，后经数据系统采集处理，得到带有结构信息的质谱图。 质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须处于高真空状态。若真空度过低，则会造成离子源灯丝损坏、本底增高、图谱复杂化、干扰离子源的调节、加速极放电等问题。 一般质谱仪都采用机械真空泵（前级低真空泵）预抽真空，再用高效率油扩散泵或分子涡轮泵（高真空泵）连续地运行以保持真空。 只有在足够高的真空下，离子才能从离子源到达检测器，真空度不够则灵敏度低。 真空系统 进样系统是将分析样品引入到离子源的装置。 进样方式： 1 直接进样 2 仪器联用的进样 （GC、LC、CE） 进样系统 色谱-质谱联用仪的接口和色谱仪组成了质谱的进样系统。 接口应满足：1. 接口的存在既不破坏离子源的高真空，也不 影响色谱柱的分离柱效； 2. 接口应能使色谱分离后的各组分尽可能多的进入质谱仪的离子源，同时使色谱流动相尽可能的不进入质谱的离子源； 3. 接口的存在不改变色谱分离后各组分的组成和结构。 仪器联用的进样 离子源将欲分析样品的原子或分子电离，得到带电离子，并对离子进行加速使其进入质量分析器。根据电离方式的不同，常用的有: 离子源 电子轰击电离源 electron impact ionization source, EI 化学电离源 chemical ionization sourc