大豆黄酮对鸡肝脏卵黄蛋白原基因表达影响及机制的研究.pdf

中文摘要 大豆黄酮对鸡肝脏卵黄蛋白原基因表达的影响及机制研究 摘要 本研究以产蛋后期肉种母鸡和海兰鸡胚为实验模型，采用体内和体外相结合的研 制． mRNA 1大豆黄酮对产蛋后期母鸡生产性能、蛋品质及肝脏中VTG 表达的影响 本实验以换羽后第二次产蛋后期(67周龄)的内种母鸡(矮脚B)为动物模型， 研究大豆黄酮对其产蛋性能与肝脏中VTGmRNA表达的影响．实验选取肉种母鸡480 只，随机分为两组：对照组(C)饲喂基础日粮，实验组(Da)在基础日粮中添喂10 mg／kg的大豆黄酮，每组设8个重复．实验周期为8周，在整个实验期问采取自由饮 水，温控在22-士1oC，光照为每天15小时．每天记录各组的产蛋数，在第5周时，收 集后三天的种蛋，每组随机抽取30枚种蛋作蛋品质分析。在第6周末，每组随机选 取10只母鸡宰杀后采样，收集血清、肝脏、卵巢，卵泡、产道等组织样品进行分析． 整个实验期间一直维持高产蛋率。蛋品质的分析结果表明：两组间种蛋平均重量无显 vs vs 0．35+0．01mm) 著差异(60．67：E0．75959．56-土-0．689)；种蛋的蛋壳厚度(0．32：t：0．01mm 和蛋壳比重(12．120．13％VS12．57士0．15％)显著增加，与对照组相比，分别增加了 13．4士0．5 清重，蛋黄颜色等指标均无显著性变化(Po．05)．添喂大豆黄酮第六周后屠宰母鸡， 采样记录结果表明：与对照组相比，大豆黄酮组母鸡的体重、卵巢内大卵泡敷、产道 母鸡肝脏中VTGmRNA的表达变化。结果表明：饲喂大豆黄酮6周后，对产蛋母鸡 肝脏中VTGmRNA的表达无显著影响(P0．05)． 2大豆黄酮对肝细胞中VTGmRNA及雌激素受体mRNA表达的影响 III 洪文杰大豆黄酮对鸡肝脏卵黄蛋白原基因表达的影响及机制研究 为了避免体内多种因素的影响，我们进一步采用体外分离培养鸡胚肝实质细胞， 采用无血清培养基来探讨大豆黄酮对VTGmRNA表达的影响． 从15胚龄的海兰鸡胚中分离得到肝实质细胞，首先采用合5％的胎牛血清培养液 预培养肝细胞，为了去除血清因素的影响，预培养24小时后，撤去培养液，采用无 r,g／mL转铁蛋白和3x10{mol／L 血清的ITS培养基(培养液中添加10肛g／mL胰岛素，5 的雌激素背景下，添加不同剂量的大豆黄酮和／或tamoxifen，处理48小时后收集细胞 uM大豆黄酮在体 及雌激素受体(ERa和ERl3)mRNA表达的影响。结果表明：100 外无血清培养的条件下，能诱导肝细胞中VTGmRNA的表达；在不同的E2的背景下， 大豆黄酮的效应存在差异，在1pME2的背景下，100rtM的大豆黄酮促进肝细胞中 VTGmRNA表达，且表现出与雌激素的协同效应；而在此条件下，添加1 pM争10肛M uME2的背景 的大豆黄酮对肝细胞VTGmRNA表达无显著性影响(PO．05)；在10 下，大豆黄醌表现出抗雌激素效应，且具有荆量依赖性．--3添加10IlM的选择性雌激 中是否添加雌激素，100心I的大豆黄酮对ERamRNA的表达没有显著的影响，而同 时添加10 TAM可显著上调ERn TAM也可显著上调ER旺 J_tM