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米曲霉生产曲酸发酵条件探究 　　摘要：【目的】优化米曲霉生产曲酸的发酵条件，提高生产效率，对米曲霉（Aspergillus oryzae）GIM3.423生产曲酸的发酵条件进行研究。【方法】采用单因素试验对摇瓶发酵条件进行优化。【结果】发酵液pH、发酵温度、装液量、摇床转速、接种量等因素影响和制约整个发酵过程，发酵温度30℃，装液量60ml/250ml，摇床转速200rpm，种龄6h，接种量10%，发酵周期控制在13d条件下，曲酸生产的转化率可达23.6%，。【结论】摇瓶发酵最佳条件为发酵温度30℃，装液量60ml/250ml，摇床转速200rpm，种龄6h，接种量10%，发酵周期控制在13d 关键词：曲酸；米曲霉；发酵条件 中图分类号：TQ925 文献标识码：A 文章编号：1003-4374（2016）06-0025-05 Abstract：【Objective】 In order to optimize the fermentation conditions for producing kojic acid by aspergillus oryzae， and improve production efficiency， in this paper， the fermentation conditions for production of kojic acid by Aspergillus oryzae GIM3.423 have been studied. 【Method】 Shaking flask fermentation was optimized by using single factors test.【Conclusion】The optimum conditions were identified as follow： temperature 30℃，liquid-loading capacity 60mL/250mL，revolution fermentation yield was improved. Key words：kojic acid；aspergillus oryzae；fermentation condition 曲酸（Kojic acid），化学名为5-羟基-2-羟甲基-1，4-吡喃酮，是一种重要的微生物合成有机酸，存在于酱油、豆瓣酱、酒类的酿造中，在许多以曲霉发酵的发酵产品中都可以检测到曲酸的存在。曲酸具有抗菌、抑菌，抑制酪氨酸酶活性，螯合金属离子，抗细胞增殖，增强免疫细胞活力，清除自由基等生物活性[1-3]，被广泛地应用在食品、化妆品、农业等领域极具开发潜力和应用前景[4-5] 随着曲酸及其衍生物的应用范围不断扩大，其市场需求也不断增加，提高曲酸的生产效率，降低生产成本成为当前的主要的研究课题。本文以曲酸产生菌米曲霉为菌种，以来源广的蔗糖为原料进行游离态发酵试验，研究并优化曲酸发酵工艺条件，以期提高曲酸转化率和生产效率，降低生产成本 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种 米曲霉（Aspergillus oryzae）GIM3.423，购于广州微生物研究所微生物菌种保藏中心 1.1.2 培养基 种子培养基（g/L）：蔗糖100，酵母膏6，KH2PO4 5，MgSO47 H2O 0.5，吐温（-80）0.01，pH6.0，121℃湿热灭菌15min 发酵培养基（g/L）：按照前期研究优化的培养基配比，蔗糖8%，酵母膏0.3%，乙醇2%，KH2PO4 0.1%，MgSO47 H2O 0.05%，KCl 0.05%，121℃湿热灭菌15min 1.1.3 主要试剂 曲酸，AR，上海源叶生物科技有限公司；3，5-二硝基水杨酸，CP，中国湖州菱湖精细化厂；蔗糖，AR，国药化学试剂有限公司；乙醇，AR，天津市大茂化学试剂厂 DNS试剂：分别称取DNS（3，5-二硝基水杨酸）10.00g，氢氧化钠16.00g，苯酚5.00g，酒石酸钾钠300.00g，依次加入到蒸馏水中溶解，定容到1000mL，避光保存一周，绘制葡萄糖标准曲线 FeCl3显色剂：以浓度为0.1% FeCl3-HCl作为曲酸显色剂：准确称取10.000gFeCl3用蒸馏水溶解添加到1000mL容量瓶中，量取22.5mL浓盐酸缓慢加入到容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀，保存备用 1.2 主要仪器 紫外可见分光光度（UV-2802H），尤尼柯（上海）仪器有限公司；全温度恒温培养振荡器ZHWY-Z11C，上海智诚分析仪器制造有限公司；低速大容量多管离心机LXJ-Ⅱ，成都欣宇实验设备有限公司；DELTA 320 pH计，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司