动物细胞融合与单克隆抗体ppt.ppt

1、定义：两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。也称细胞杂交 2、诱导融合的因素 生物法：灭活的病毒诱导融合.(病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。) 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法：电激融合 (三)动物细胞融合的应用 二、单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体？ 单克隆抗体的制备 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 提取单克隆抗体。 1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 2、用于治疗疾病和运载药物： 主要用于癌症治疗。 生物导弹： 单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。 单克隆抗体的制备 2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在 这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） ①淋巴细胞　 ②小鼠骨髓瘤细胞　 ③B淋巴细胞自身融合细胞　 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞　 ⑤杂交瘤细胞 A． ②④ B．①③⑤　　 C． ①②③④ 　 D．②③ C 植物体细胞杂交的意义： 打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。 一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动。 两个细胞正在融合 受精作用 (一)动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 （二）动物细胞融合的过程 与植物原生质体融合原理相同，方法类似。 杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 （三）单克隆抗体的应用 与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏度高，并可大量制备。 应用主要有： 1、作为诊断试剂 2、用于治疗疾病和运载药物 准确、高效、简易、快速 把抗癌细胞的单克隆抗体与药物相结合，制成“生物导弹”。 * * 电影《人兽杂交》剧照 一、动物细胞融合 杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 不能，因为不灭活的病毒会感染细胞。 1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。(至今种间、属间、科间，甚至动物与植物之间的细胞融合已获得成功。) 2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。 3.为制造单克隆抗体开辟了新途径。 鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、 人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡 、人—胡萝卜等 什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞（浆细胞）能产生抗体。 （一）获得抗体的传统方法 1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。 2、缺点： 产量低，纯度低，特异性差。 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异