6章 DNA重组5.31GH.pptVIP

DNA重组 第六章 DNA的重组 DNA分子内或分子间遗传信息的重新组合。重组产物为重组体DNA (recombinant DNA) 。DNA的重组广泛存在于各类生物。真核生物基因间重组多发生在减数分裂(meiosis)时同源染色体之间的交换（crossover) 。细菌及噬菌体的基因组为单倍体，来自不同亲代两组DNA之间可通过多种方式进行遗传重组。 DNA重组对生物进化起着关键的作用。生物进化是生物随时间发生变化和多样化的过程。生物进化以不断产生可遗传的变异为基础。首先有突变和重组，由此产生遗传的变异，然后才有自然选择(natural selection)，才有进化。可遗传变异的根本原因是突变。然而，突变的机率很低，而且多数突变是有害的。如果生物只有突变没有重组，在积累具有选择优势的突变同时不可避免积累许多难以摆脱的不利突变，有利突变将随不利突变一起被淘汰，新的优良基因就不可能出现。重组的意义在于，它能迅速增加群体的遗传多样性(diversity)；使有利突变与不利突变分开(separation)；通过优化组合(optimization)积累有意义的遗传信息。此外，DNA重组还参与许多重要的生物学过程。它为DNA损伤或复制障碍提供修复机制。某些生物的基因表达受DNA重组的调节。 Holliday模型中，同源重组主要4个关键步骤 ①两个同源染色体DNA排列整齐 ②一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应的链连接，形成Holliday中间体 ③通过分支移动产生异源双链DNA ④ Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA。切开的方式不同，所得到的重组产物也不同。 二、参与同源重组的主要蛋白质 2、recBCD酶 解旋酶活性：在SSB存在时解开双螺旋 ATP酶活性 核酸外切酶活性 核酸内切酶活性 ——产生DNA单链 3、RecA 主要功能是促进同源序列配对和链交换，RecA含有2个DNA结合位点，能分别结合单链DNA和双链DNA，当RecA与DNA单链结合时，数千RecA单体协同聚集在单链上，形成螺旋状纤丝(helical filament)。RecF、RecO和RecR蛋白调节RecA纤丝的装配和拆卸。 4、RuvAB复合物——置换RecA RuvA（四聚体） 识别Holliday连接体的结构 在交换点处与DNA四条链结合 RuvB（六聚体） ATP酶，有解旋酶活性 ——为分支迁移提供动力 5、RuvC 核酸内切酶 切开Holliday连接体 识别不对称位点ATTG Rec BCD同源重组途径 Rec BCD蛋白在chi位点3’侧的一条链上产生切口。 Rec BCD蛋白同时具有解螺旋酶的活性，使chi位点附件切口的DNA解链 单链区被Rec A蛋白和SSB蛋白覆盖 RecA 蛋白使单链DNA取代双链DNA中的同源部分 D－loop区域的DNA产生切口，新切口的3’端（ the tail of newly nicked DNA ）与另一条DNA的单链区互补配对 DNA连接酶封闭切口，形成Holliday junction RuvA 和RuvB发动迁移反应 RuvC拆分重组中间体 λ噬菌体DNA的物理状态 裂解状态（phage）： 为独立分子形式 在受侵染细菌中为环状 溶原状态（Prophage）：细菌染色体的整合部分 二、原核生物的转座因子 1、第一类转座子 即插入序列（Insertion Sequence，IS） ——是简单转座模序 只编码起始自己转座的蛋白 转座频率各异 结构特点： 两侧末端为反向重复序列（inverted repeats，IR） 2、第二类转座子（复杂性转座子） ——带有编码转座功能酶的基因 及抗性（或其他标记）基因 3、第三类转座子（复合性转座子） 由2个IS和一段带有抗性（或其他标记）基因组合而成 三、真核生物的转座子 玉米地中的先知 Barbara McClintock （芭芭拉·麦克林托克） Hello, I am Barbara McClintock. Ever since gradate school I had been interested in Corn. I tried to correlate chromosome behavior with the resul