第二三章 紫外可见吸收光谱法.ppt

第二章 紫外-可见吸收光谱法 2.1 信号和信息的特征 2.2 紫外-可见吸收光谱法定量分析基础 2.3 紫外可见分光光度计的基本组成与结构 2.4 紫外可见分光光度法的基本实验技术 2.5 紫外可见光谱法的应用 光谱分析概述 光学分析方法：待测物受到某种能量作用后，产生光等信号或引起光信号变化的分析方法 光谱类型：分子光谱、原子光谱 光与物质相互作用的方式 反射，漫反射反射光谱法 吸收与透射吸收光谱法 发射发射（荧光）光谱法 散射散射光谱法 折射 衍射与干涉 偏振与旋光 光的波粒二象性 1.光的波动性 光波的描述 光的粒子性 电磁波谱 光谱的基本类型 电子跃迁 粒子结构与光谱特征 2.1 信号和信息的特征 2.1.3 分子外层价键电子的轨道与能级 2.1.2 紫外可见光谱的信息 2.1.3 信息负载的宏观过程 特点 紫外-可见(ultraviolet-visible 简称UV-VIS)吸收光谱分析:利用分子内电子,跃迁产生紫外-可见吸收光谱来进行定性定量分析。 原子的d,f 轨道电子 2.1.3 分子外层价键电子的轨道与能级 原子轨道: S,P,D,F 分子轨道: s, p, n, p*, s* 分子轨道具有不同的能级，这些能级的允许跃迁产生分子吸收光谱。 STRUCTURE AND ENERGY 2.1 信号和信息的特征 2.1.1 分子外层价键电子的轨道与能级 2.1.2 紫外可见光谱的信息 2.1.3 信息负载的宏观过程 1.产生UV-VIS 吸收的几种跃迁 s s* :C C, C H; p p* :C=C ,C=O,C ? C;（K带） n s* :O,N,P,卤素; n p* :同时有 n, p 轨道;（R带） 共轭P P*:具有共轭P键； 电荷迁移: d ,f 电子跃迁：过渡金属元素 分子轨道能级与跃迁 2. 简单分子的紫外-可见吸收法 简单分子的紫外-可见吸收 含氮化合物 EFFECT OF CONJUGATION SPECTRUM OF ANTHRACENE DOES IT ABSORB IN THE UV/VIS REGION? 叶绿素的吸收光谱 叶绿素的分子能级 结 论 植物色素系统是若干亿年生物进化的结果，按光谱分析理论可以理解：该系统可以最充分与有效地利用太阳能。 2.2.1比尔定律 2.2.2 比尔定律与光谱的表达 2.2.3 比尔定律图解 2.2.4 比尔定律的局限性 物质只能吸收特定频率的光（单色光）； 无限稀溶液（各物质的吸收独立）； 物质间无相互作用（物质之间，物质与样品间）。 实际因素 非单色光（1/5 光谱带宽） 非平行光 光的散射（或漏光、高级衍射光） 高浓度（ 0.01M） 化学作用（pH,电离，缔合等） 荧光 折光系数的改变 仪器噪声 EFFECT OF STRAY LIGHT EFFECT OF pH VALUE 第三章 紫外-可见吸收光谱法 3.1 信号和信息的特征 3.2 紫外可见分光光度计的基本组成与结构 3.3 紫外可见分光光度法的基本实验技术 3.4 紫外可见光谱法的应用 单色器的性能 棱镜分辨率：R=b (dn/dλ) 光栅分辨率：R= m N 单色器带宽：Δλ=S (dl/dλ)-1=S(dδ/dλ)-1/f 2.3.2 整机的光路结构 SOLVENT CUT-OFFS 溶剂极性的影响 导数光谱消除宽背景吸收干扰 分辨两个紫外光谱相近组份 DOES IT ABSORB IN THE UV/VIS REGION? MOLECULAR STRUCTURE OFCOOMASSIE BRILLIANT BLUE SPECTRUM OF COOMASSIEBRILLIANT BLUE 小测验题 1．紫外光谱仪信号的能量、带宽、信噪比对定性、定量分析结果会造成哪些影响？ 2.某化合物在分析波长处的摩尔吸光系数为　 1000/cm·(mol/L), 若所用分光光度计的读数误差ΔＴ＝0.005，光程=10mm, 现有浓度Ｃ分别为０.３、３０毫mol/L 二种浓度的样品，计算在该分光光度计中的吸光度Ａ、透过率Ｔ，与由于仪器的读数误差产生的浓度测量相对误差Δc/c（将结果列表给出）。分别指出在上述二种情况下，减少浓度相对误差各自最有效的方法（１０0.3＝２）。 EFFECT OF SUBSTITUENTS 局限性 表面上看，折射示差法的应用是不受限制的，实际并不如此，随着放大倍数a的增加，必须加大狭缝和提高检测器的灵敏度，导致噪声升高，且偏离线形。 2.双波长法和多组分测定 a b 比尔定律满足线性加和