片段分析的常见故障排除.PDFVIP

片段分析的常见故障排除 Field Application Scientist Tel :800 820 8982/400 820 8982 E-mail: cntechsupport@ The world leader in serving science 1 高质量的片段分析数据 •峰形正常，合适峰高(峰高+峰形) •正确确定峰的大小(Sizing Quality + Size Curve) • 基因分型结果准确(Allele Calling) • 结果重现性好 2 信号强度 • 信号强度是峰检测的一个重要标准 • 常见问题 • 信号太低或没有信号 • 信号太高 • 信号不均匀或逐渐下降 • 症状 • 某个峰未被检测到 • 某个峰未被正确检测(被检测为多个峰) 3 信号过低 • 症状 • 低峰高 • 通过分析软件不能检测到峰 • 原因 • 信号弱或没有扩增 • 模板质量、浓度、PCR抑制 • PCR仪故障 • PCR试剂问题 • 电泳前PCR产物过度稀释 • PCR产物浓度低或没有进样 • 孔里没有样品 • 孔里有气泡 • 自动取样器校准 • 激光问题 • 电泳 4 PCR 抑制 • 样品 •提取 • 血色素 • 氯仿 • 肝磷脂 • 苯酚 • 多酚(植物样品) • EDTA • 多聚糖 • 清洁剂(SDS) • 二甲苯 • 酒精 • 溴苯酚蓝 设置一个阳性PCR对照 ! 5 信号过低 Peak Heights ~ 40-180 rfus 6 样品和内标信号不平衡 Sample : Size Standard = 3 : 1 7 信号过高 • 症状 • Pull up峰 • Pull-down峰 • Wide or flat-topped峰 • 原因 • 样品进样过多(样品没有充分稀释) • 反应中模板过量 * 其他影响进样的因素