尿素分解1的应用.ppt

复 习 巩 固 1、什么是选择培养基？ 2、平板计数应注意什么问题？ 3、如何设置对照实验的实验步骤？ 实例分析 第一同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 实例启示 1、在实验设计时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性 2、在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 * 平度一中 生物组 土壤分解尿素的细菌的分离与计数 学 习 目 标 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 脲酶 尿素 二.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 （一）筛选菌株 1.从哪里筛选? 2.怎样筛选? 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长 多种微生物混杂→稀释培养→菌落→筛选→挑取纯化 多种微生物混杂→选择培养→菌落→筛选→挑取纯化 缺点：含量少的微生物，在稀释倍数小时，其他微生物菌落叠加，稀释倍数大时，又找很难找到菌落。 实例： PCR技术是一种在体外大量复制DNA的技术，此技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求， 到相应的环境中去寻找。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多 数微生物，只有耐高温的细菌被筛选出来。 （1）在这个配方中，微生物生长所需碳源和氮源分别是什么? （2）对所培养的微生物有选择作用吗?如果有怎样选择? 请分析思考： 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、实例分析： 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、培养基选择分解尿素的微生物的原理 5、选择培养基 在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 （1）无氮培养基 （2）不含有机碳的培养基 （3）给予无氧环境的培养基 （4）加抗生素的培养基 （5）加高浓度食盐的培养基 ——固氮菌 ——自养型微生物 ——厌氧性微生物 ——选择真核微生物 ——金黄色葡萄球菌 缺 少 添 加 控制条件:营养、PH、温度等 （二）统计菌落数目 稀释涂布平板法 显微镜直接计数 ——分离、计数 1、利用稀释涂布平板法统计菌落数目的关键是 统计平板上的菌落数 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌 一般选择菌落数在 30～300 的平板进行计数 2、在菌落计数时，每隔一定时间统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果， 每克样品中的菌落数的计算 （平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数 。 3、为提高数据的准确性，计数时要计数三个或三个以上， 再计算出平均数。 恰当的稀释度 菌落数 活菌数 ＜ 统计数 活菌数 ＞ （三）设置对照 营养因素、环境条件、培养方法 结果 测试因素 非测试因素 自变量 无关变量 因变量 设置对照目的是：排除实验组中非测试因素对实验结果 的影响，提高实验结果的可信度。 怎样才能知道测试因素对结果的影响呢？ ——设置对照 设置对照实验的步骤： ①取材、分组、编号 ②控制自变量 ③消除无关变量 ④观察因变量 A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 一是由于土样不同 二是由于培养基污染或操作失误。 实例分析 请思考：究竟是哪个原因呢？如何来证明？ ——P22-23的案例： 另一种方案： 　　将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 一种方案： 　　可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力， 对照的设置是必不可少的。 实 验 设 计