god法测定血清中葡萄糖浓度.ppt

葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 实验九 一、实验目的 (1)了解血糖的概念。 (2) 掌握血糖的测定方法——葡萄糖氧化酶法。 What？ 血糖及正常血糖水平: 血糖：指血液中的葡萄糖. 正常血糖浓度： 空腹波动在3.89～6.7mmol/L（70～110mg/dl） 餐后2h内应≤7.8mmol/L（≤140mg/dl）。 血糖的来源、去路 血糖水平恒定的生理意义 保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以葡萄糖供能的组织器官。 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡萄糖供能； 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供能。 测定方法 无机化学法： Folin-Wu法 有机化学法：邻甲苯胺法 酶法：葡萄糖氧化酶法 血糖测定的常用方法 方法 类型 原 理 用途及备注 磷钼酸法 定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 稳定、准确、但对 （Folin-Wu） 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物 葡萄糖无特异性， 　　　　　　　　　　　　（430nm）　　　　　　　 受血中非糖还 原物 质的影响。 邻甲苯胺法 定量 G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱 较Folin-Wu法特异 　　　　　　　　　　　（630nm）　　　　　 但不及酶法。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 D-甘露糖能与邻甲 　　　　　　 　苯胺反应，生成类 　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 似吸收光谱，造成 　　　　　 正误差。 （一）化学法 酶法分析是指用酶作为工具定量测定某种物质含量的分析方法。定量分析的目标可以是酶的底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制剂。 （二）酶 法 酶法分析的主要方法： 单酶反应定量法和偶联酶反应定量法 单酶反应定量法：指用一种酶为工具酶定量测定某种物质的方法。 偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产物反应底物或产物的物理化学手段无法区分时，还可以借助另一种酶作为指示酶，通过偶联反应进行定量分析。 方法 类型 原 理 用途及备注 己糖激酶 定量 G+ATP→G-6-P+ADP 血清尿液脑脊液、 （HK）法 分光 G-6-P + NADP+ 公认参考方法 　　　　 　动态 →GA-6-P + NADPH 操作简便，特异 　　　　 　终点 　（340nm） 性和灵敏性均高 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 推荐常规方法 葡萄糖氧 同上 G+O2 → GA+H2O2 　化酶（POD） H2O2 + 染料→有色染料 　偶联法 （还原型） （氧化型） 可制试纸片定量 （Trinder） 　（4-氨基安替比林+酚 半定量筛选试验 　　　 →红色琨类化合物505nm） 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理 （1）葡萄糖＋O2＋H2O （2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚 葡萄糖酸＋H2O2 葡萄糖氧化酶（GOD） H2O ＋红色醌式物质 过氧化物酶 （POD） Trinder反应 505nm 光吸收法测定 相对血糖浓度 （1）取3支试管，按下表加入试剂: 试剂 标准管(ml) 测定管 (ml) 空白管(ml) 血清样品 – 0.03