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第3章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全 目 的 要 求 掌握：消毒、灭菌、抑菌、无菌、防腐、无菌操作的概念； 熟悉：高压灭菌、紫外线及滤过除菌法的应用范围。 第一节 消毒灭菌常用术语 1、灭菌（sterilization）：杀死物体上所有微生物（包括芽胞）的方法。 2、消毒（disinfection）：杀死物体上或环境中的病原微生物的方法。 消毒剂：用于消毒的化学药品。常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。 3、防腐（antisepsis）：防止或抑制微生物的生长的方法。 防腐剂：用于防腐的化学药品。 4、清洁（cleaning）：是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。 5、无菌（asepsis）和无菌操作：无菌是无活的M存在，多是灭菌的结果。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。 第二节 消毒灭菌的方法 一、物理消毒灭菌法 （一）热力灭菌法 高温对细菌有明显的致死作用：蛋白质变性；核酸断裂。 1、干热灭菌法 杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性。 （1）焚烧 废弃物品或动物尸体等。 （2）烧灼 接种环、试管口等的灭菌。 （3） 干烤 利用干烤箱灭菌（160~170oC，2h），适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品 （4） 红外线 是一种0.77~1000μm波长的电磁波，尤以1~10μm波长的热效应最强。热效应只能在照射到的表面产生。与干烤相似，多用于医疗器械的灭菌。 2、湿热灭菌法 最常用，效果优于干热灭菌法。 同样条件下湿热效果强于干热的原因： 湿热的穿透力强 热蒸汽有潜能 蛋白质含水量越多越容易变性 1、高压蒸汽灭菌法：103.42Kpa经121.3℃，维持15—30分钟，适用于耐高压和湿热的物品，如培养基、手术衣、手术器械等。 2、巴氏消毒法：61.1—62.8℃持续30分钟或71.7℃持续30秒，用于酒类和乳制品的消毒。 3、流通蒸汽消毒法：利用一个大气压下100℃的水蒸气进行消毒。细菌繁殖体15~30min可被杀灭。 4 、间歇蒸气灭菌法 利用反复多次的流动蒸汽间歇加热以达到灭菌的目的。适用于不耐高热的含糖、牛奶等培养基。 5、煮沸法：100℃持续5—10分钟，可用于手术器械、食具的消毒。水中加入2%碳酸氢钠，既可提高沸点达105oC，促进杀灭细菌的芽胞，又可防止金属器皿生锈。 （二）辐射杀菌法 1、紫外线： （1）原理：干扰DNA复制（使细菌DNA形成胸腺嘧啶二聚体），从而导致细菌死亡。 （2）杀菌特点：265nm波长的紫外线杀菌力最强，但是穿透力较弱。 （3）应用：物体表面和空气的消毒。 （4）紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用。 2、电离辐射： （1）原理：x射线、γ射线、高速电子等产生游离基，破坏DNA。 （2）应用：用于不耐热塑料、橡胶制品、中草药及食品的灭菌。 3．微波 波长为1~1000mm的电磁波。可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物质，但不能穿透金属表面。主要用于食品、非金属器械、检验室用品、无菌室和病室中食品用具、药杯及其他用品的消毒。 （三）滤过除菌法 用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌，达到无菌的目的。 所用的器具是滤菌器（薄膜滤菌器、玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器）。 主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。 （四）超声波消毒法 不被人耳感受的高于20kHz/s的声波，称为超声波。超声波可裂解多数细菌，尤其是G-菌。 主要用于粉碎细胞，以提取细胞组分或制备抗原等。如超声振荡仪 （五）干燥和低温抑菌法 低温：保存菌种。 1、冰箱 2、液氮罐 3、冷冻真空干燥法：为目前最好的保存菌种的方法，可保存数年至数十年。 二、化学消毒灭菌法 （一）常用消毒剂的杀菌机制： 1、促进菌体蛋白质变性或凝固。 2、使微生物细胞成分氧化、水解。 3、干扰和破坏细菌酶的活性。 4、损伤细菌的细胞膜 。 （二）化学消毒按杀菌能力剂分三类： 1、高效消毒剂（high-level disinfectants） （1）含氯消毒剂；（2）过氧化物消毒剂； （3）醛类消毒剂；（4）环氧乙烷 2、中效消毒剂（intermediate-level disinfectants） （1）含碘消毒剂；（2）醇类消毒剂 3、低效消毒剂（low-level disinfectants） （1）季铵盐类；（2）氯已定；（3）高锰酸钾 第二节 消毒灭菌的运用 一、医疗器械物品的消毒灭菌 （一）高危器械物品 用时需进入无菌组织的物品。所有这些物品都应该灭菌。 （二）中危器械物品 用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采用消毒即可。 （三）低危器械物品 只接触未损伤皮肤但不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。一