丁苯酞作用机制-课件.pptVIP

线粒体通过内部的呼吸链传递电子，同时将质子泵出线粒体外，形成线粒体膜电位，最后线粒体膜外质子通过ATP合酶作用回流入膜内释放电势能，驱动ADP磷酸化生成ATP。在电子传递的过程中，线粒体复合酶Ⅳ负责将电子传递给氧形成终产物水。由此过程我们显然能看到线粒体，特别是线粒体呼吸链的正常功能在细胞能量代谢过程中起着重要作用。 * 除了完成能量代谢外，线粒体还具有其他重要的生物功能，第一，线粒体通过钙离子摄入发挥储存钙离子的作用，线粒体内低水平该可作为生物能信使刺激Ca2+敏感性脱氢酶活性，增加ATP的合成，线粒体内高水平Ca2+刺激Ca2+释放在细胞增殖中也发挥着重要作用；第二，线粒体在进行氧化还原过程中会形成氧自由基，生理条件下可被线粒体内丰富的抗氧化系统，尤其是SOD代谢，不会对线粒体或细胞产生危害；第三，线粒体途径是引起细胞凋亡的主要途径，线粒体细胞色素C的释放是线粒体途径细胞凋亡的起始环节。 * 由于线粒体对缺血缺氧最敏感，缺血缺氧首先对线粒体造成损伤，线粒体膜结构及功能的损伤造成了细胞的能量合成障碍，ATP产生减少，导致细胞功能障碍；线粒体酶功能障碍后产生大量氧自由基，对DNA、蛋白和细胞膜造成损伤；另一方面由于线粒体膜的通透性增加，线粒体释放细胞色素C，激活Caspase3(半胱天冬蛋白酶3)，Caspase3启动细胞凋亡重要的信号分子，Caspase3激活后导致细胞凋亡，缺血中心区不断扩大。通过保护线粒体可以从起始点保护线粒体的能量代谢和减少神经细胞的坏死和凋亡，从而最大限度地挽救半暗带。 * 首先我们从形态学角度直接观察恩必普对线粒体结构的保护作用。培养血管内皮细胞，将其分为3组：正常对照组，低氧低糖处理组，低氧低糖处理同时加入恩必普组。在处理3小时后，用荧光抗体特异性标记线粒体，观察其结构。在荧光显微镜照片中，我们可以很清楚的看到，和正常对照组相比，低糖低氧处理组荧光强度明显的减弱，而加入恩必普治疗组其荧光强度明显增强。统计分析的结果显示，低氧低糖处理会显著增加线粒体裂解细胞比例，在低氧低糖处理同时使用恩必普治疗可以显著降低线粒体裂解细胞比例，证实恩必普可以在低氧低糖条件下保护线粒体结构的完整。 * 前面已经介绍过，线粒体复合酶负责电子传递并将质子泵出膜外，形成的电势差驱动ATP合酶将ADP磷酸化生成ATP，所以维持线粒体复合酶的活性能够保证线粒体电子传递的正常的进行和ATP的产生，对维持能量代谢具有重要作用。 选取原代培养的神经元细胞，进行低氧低氧处理，同时加入不同浓度的恩必普，观察线粒体复合酶Ⅳ活性的变化。从图中可以清楚的看到，低氧低氧处理后，线粒体复合酶Ⅳ的活性明显降低，加入恩必普治疗组，其线粒体复合酶Ⅳ的活性得到明显恢复，且具有剂量依赖效应。这一结果证实，在低氧低糖条件下，恩必普能有效维持线粒体复合酶的活性，保证脑细胞正常的能量供应。 * 线粒体的重要功能之一是调节细胞内的Ca2+浓度，进而改变细胞内的钙信号。在线粒体膜上，存在各种ATP酶如Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶，这些ATP酶通过利用ATP的能量跨膜转运离子，从而调节细胞内外离子浓度。在脑缺血再灌注时这些酶的活性会显著降低，导致细胞内离子浓度紊乱，激活了一系列的蛋白水解酶，引起迟发性细胞死亡。而恩必普可以改善这些酶的活性。 这是一个大鼠缺血再灌注模型，先阻断大鼠大脑中动脉2小时，然后恢复血流，再灌注24小时。治疗组是在缺血前10分钟腹腔注射不同浓度恩必普。可以看到，和正常的假手术组相比，模型组的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性均显著降低，而恩必普治疗则可以明显恢复这些酶的活性，维持线粒体调节细胞内Ca2+浓度的功能。 * 前面已经介绍过，线粒体膜电位是驱动ATP合酶将ADP磷酸化生成ATP的原动力。因此在缺血缺氧条件下，维持 线粒体的膜电位对于维持正常的脑细胞能量供应非常重要。下面我们来看看恩必普在这方面是否可以发挥作用。 对原代培养的大鼠神经元细胞进行低氧低糖处理，同时治疗组加入不同浓度的恩必普。可以发现和正常对照组相比，低糖低氧处理后30分钟线粒体的膜电位即迅速下降，而加入不同浓度的恩必普均可不同程度地减轻这种线粒体膜电位的降低，证实恩必普具有维持线粒体膜电位，保证ATP生成的重要作用。 线粒体膜具有一定的流动性。在线粒体呼吸链的正常工作中，电子转运体需要在膜内运动，以便在复合酶之间传递电子。因此维持线粒体膜的流动性是影响线粒体呼吸链正常运转的重要因素。 * 在线粒体电子传递过程中，线粒体复合酶需要在膜上运动以将电子传递给下一个复合酶，线粒体膜的流动性是影响线粒体复合酶运动的重要因素。在前面提到的实验中，作者通过测量线粒体膜的微粘度来观察线粒体膜流动性的变化，从结果来看，低糖低氧处理后，线粒体膜的流动性明显