缝隙连接在HCY和TGF-β1介导大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究.pdfVIP

A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Wu Lingling （Pathology and pathophysiology ） Dissertation Supervisor: Prof. He Fang May, 2013 目 录 中文摘要 Ⅰ 英文摘要III 英文缩略词 V 前 言 1 材料和方法4 1 材料4 2 方 法 8 3 统计学方法 13 结 果 14 1 大鼠主动脉血管平滑肌细胞的培养及鉴定 14 2 激光共聚焦观察大鼠主动脉血管平滑肌细胞Cx43、Cx40 表达及定位 15 3 不同处理因素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响 16 4 不同处理因素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞Cx43、Cx40 表达的影响23 5 不同处理因素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞缝隙连接功能的影响26 讨 论 31 一、缝隙连接在Hcy、TGF-β1 介导大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖中的作用 31 二、缝隙连接在Hcy、TGF-β1 介导大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖中的作用机制研究 32 三、小结及展望 34 结 论 36 参考文献 37 文献综述40 致 谢 50 作 者 简 历 51 导师评阅表 52 摘 要 目 的：探讨缝隙连接在同型半胱氨酸(Hcy)和转化生长因子β (TGF-β )介导大鼠血管平滑肌细胞增殖 1 1 中作用及机制。 方 法：(1)用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC) ，用胰蛋白酶消化法进行细 胞传代培养，α-平滑肌肌动蛋白(α-Actin)相关抗原鉴定。取3-5 代细胞，MTT 法检测不同浓度Hcy(0、 0.01、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5mmol/L)和不同浓度TGF-β (0、0.01、0.1、1、10 ng/mL) ，作用不 1 同时间（0、12、24、48、72h ）对VSMC 增殖的影响，确定Hcy 和TGF-β 作用浓度和作用时间， 1 然后分8 组：Control 组、Hcy 组、TGF-β 组、Hcy+TGF-β 组、缝隙连接阻断剂(18α-GA)组、Hcy+18α-GA 1 1 组、TGF-β +18α-GA 组和Hcy+TGF-β +18α-GA 组；(2) MTT 法及流式细胞仪检测大鼠VSMC 增殖 1 1 活性；(3) 免疫荧光技术观察大鼠VSMC 中Cx43、Cx40 蛋白表达及定位；(4)Western blotting 技术 检测大鼠VSMC 中Cx43、Cx40 蛋白表达；(5)染料示踪分子传递法(划痕标记染料传输法)检测大鼠 VSMC 缝隙连接功能。(6)实验数据用均数±标准差表示，组间比较用单因素方差分析，组间两两比 较采用SNK 法检验。所有数据采用SPSS13.0 统计软件包进行分析，以P0.05 表示差异有统计学意