关节炎疼痛对大鼠脊髓背角星形胶质细胞的影响.pdfVIP

中国疼痛医学杂志 Chinese Journal of Pain Medicine 2007，13，(6 · 科研简报 · 关节炎疼痛对大鼠脊髓背角 星形胶质细胞的影响术 罗 云 吕 恩 张 敏 简道林 王顶鸣 ( 宜昌市第一人民医院麻醉科，湖北宜昌443003； 三峡大学仁和医院麻醉科，湖北宜昌443001) 关节炎性病变引发的慢性疼痛是困扰关节炎患 4．测痛方法 参照刘红香等 进行屈关节疼 者的首要症状，严重影响患者的工作和生活，现有临 痛试验的缩腿嘶叫评分。在模型制备后第四周，将 床治疗方法常不能有效缓解关节炎患者的慢性疼 大鼠装入塑料固定器，其双后肢及尾自由伸展暴露， 痛¨ 。因此，有必要深入研究关节炎疼痛产生的机 向脚掌侧缓慢屈曲踝关节(跖曲)，间隔30 S进行一 制，寻求更为有效的治疗方法。近年来的研究表明， 次，共5次。屈踝关节时出现嘶叫或明显缩足反应 脊髓中胶质细胞激活在炎性疼痛的产生和维持中发 则评分为1，两者都有评分为2，无反应评分为0，最 挥着重要作用 ’ ，但脊髓中胶质细胞激活与关节 高10分。 炎慢性疼痛的关系并不清楚。本研究采用大鼠佐剂 5．GFAP免疫组织化学染色 腹腔注射戊巴比 单发关节炎疼痛模型，探讨关节炎疼痛与脊髓星形 妥钠40 mg／kg深麻醉下，开胸经心尖插管至升主动 胶质细胞激活的关系。 脉，灌注0．9％NS 100 ml，继之以含4％多聚甲醛的 0．1 mmol／L磷酸缓冲液500 ml灌注固定。取脊髓 材料与方法 腰膨大(L ～ 节段)置于4％多聚甲醛中固定4 h后 取出，用梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋。连续切片 1．实验动物及试剂 Wistar大鼠20只，雌雄各 (片厚 6 Ixm)，SABC法常规免疫组织化学染色， 半，体重150～180 g(同济医学院实验动物中心)， DAB显色，中性树脂封片。 随机分为对照组和实验组(n：10)。室温20～ 6．图像分析 用DC200图像采集系统进行图 25℃，单笼饲养，12h人工昼夜节律，自由进食和饮 像采集，对照组与各实验组在相同光源条件下进行 水。 取图，用40倍镜每张切片随机取10张图像。用Im． 2．实验主要试剂及仪器 完全弗氏佐剂(CFA) age—Proplus 5．0彩色图像分析软件测定阳性面积 和多聚甲醛购于美国Sigma公司；抗GFAP一抗兔 和灰度值取平均值。 IgG(兔多克隆抗体)和SABC免疫组化试剂盒购于 7．统计学处理 数据均用X±S表示，采用 武汉博士德公司；DAB显色试剂盒购于北京中山试 SPSS 10．0软件，用独立样本t检验进行统计学处 剂公司；DC200图像采集系统、IM50型图像采集软 理。P0．05为差异有显著性。 件、Image．Proplus 5．0彩色图像分析软件由德国Lei． oa公司生产。 结 果 3．单发佐剂性关节炎模型制备 异氟醚吸人麻 醉大鼠后，左侧卧位，用75％酒精将右侧外踝周围 实验组大鼠左足屈关节疼痛试验的缩腿评分大 皮肤消毒，从外踝后外侧凹陷处用微量取液器将针 于实验组右足(P0．05)和对照组左足