利用PCR结合膜芯片技术检测结核分支杆菌的实验研究.pdfVIP

广 西 医 科 大 学 学 报 JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY 2007 Dec：24(6)‘， RSI · 843 · 利用PCR结合膜芯片技术检测结核分支杆菌的实验研究 刘 斐 周凌云 何 晓。 何 敏△ (广西医科大学医学科学实验中心 南宁 530021) 摘要 目的：探讨聚合酶链反应(PCR)结合膜芯片技术用于检测结核分支杆菌的方法。方法：标记生物素的特异性引物，扩增 17株菌标本IS6110插入序列的245 bp目的基因，结合膜芯片杂交检测结核分支杆菌基因。结果：15株结核分支杆菌标本中 有12株扩增出245 bp目的基因，2株大肠杆菌及阴性对照标本 PCR扩增结果为阴性。经膜芯片杂交，12株结核分支杆菌标 本中有l1株显色结果为阳性，其余显色结果为阴性。PCR结合膜芯片检测结核分支杆菌的灵敏度为73．3 ，特异度为 100 。结论：PCR结合膜芯片技术是一种具有发展潜力的检测结核分支杆菌的方法。 关键词 结核分支杆菌；膜芯片检测技术；聚合酶链反应 中国图书资料分类法分类号 R378．911 THE EXPERIMENTAL STUDY oF DETECTING MYCoBACTERIUM TUBERCULOSIS BY PCR AND GENE MEMBRANE CHIP Liu Fei，Zhou Lingyun，He Xiao，et a1．(Medica1 Scientific Research Center of Guongxi Medica1 Universi— ty，Nanning 530021 China) Abstract Objective：To establish PCR and microarray primely for detecting mycobacterium tuberculosis (MTB)．Methods：Primers marked by biotin amplified IS6110 245 bp in 17 bacteria strains，and microarray detected MTB．Result：The 245 bp of 1 2 in 1 5 MTB strains were amplified，and the results of 2 E．coli strains and negative contro1 sample were negative．After hybridization by microarray，the results of 1 1 in coloured 1 2 MTB strains were positive，while the other results were negative．The sensitivity and the spe— cificity was separately 73．3％and 100 by PCR and microarray detecting MTB．Conclusion：PCR and mi— croarray will be a hopefully potential method for detecting MTB． Key words mycobacterium tuberculosis；recerse dot blotl(RDB)；PCR 膜芯片检测技术，也即膜片反向点杂交(recerse dot 1 材料与方法 blot，RDB)技术，该技术由DNA探针、核酸杂交、酶联显色三 部分组成，是近几年发展起来的新的基因诊断技术，它的主 1．1 标本来源：15株结核分支杆菌标本和 2株不同类型的 要特点是特异性探针先交联在固相载体膜上，在液体环境中 大肠杆菌(E coli．)标本由广西医科大学实验中心提供。其中 与PCR产物即流动相中的靶序列特异结合，再经过酶显色 结核分支杆菌标本