PV-6001兔DAB染色液（聚合物法）说明书.PDFVIP

兔二步法试剂盒 （兔聚合物法检测系统）说明书 PV-6001 【产品名称】 通用名称：兔二步法试剂盒 （兔聚合物法检测系统） 【包装规格】 3mL，6mL，18mL，55mL，110mL。 【预期用途】 主要用于免疫组织化学染色的显色。 【检验原理】 辣根过氧化物酶（HRP ）标记的山羊抗兔IgG 聚合物与结合在组织片上的一抗反应形成免疫复合物，聚合物上的HRP 催 化显色底物（DAB 或AEC ）形成不溶性色原，从而在显微镜下显示出组织片中的特定抗原的位点。 【主要组成成份】 包装规格： 3mL 6mL 18mL 55mL 110mL 试剂1：内源性过氧化物酶阻断剂 3mL 6mL 18mL 55mL 110mL 试剂2 ：酶标山羊抗兔IgG 聚合物 3mL 6mL 18mL 55mL 110mL 【储存条件及有效期】 2～8℃避光保存，不得冻存；产品有效期为12个月。 使用时即拿即放，单支试剂使用后应立即放回冰箱，开封后试剂有效期6个月。 【适用仪器】 手工操作。 【样本要求】 1、标本类型：活检或手术切除标本。 2 、标本固定：所有组织标本离体后（1小时内）尽快采用10%中性缓冲福尔马林固定，固定液与所浸泡组织的比例应足 够。固定时间以8～72小时为宜。 3、组织切片：未染色的切片置于室温不宜超过6周，以防抗原丢失。切片厚度3～5µm黏附在防脱玻片上，56～60℃烤片 2小时。 【检验方法】 1、检验所需仪器、设备：移液器、恒温箱、修复仪、免疫组化笔、计时器、孵育盒、染色架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶。 2 、试剂准备：DAB 显色液需要在使用前配制。 3、操作程序： a) 脱蜡和水化 石蜡切片置于新鲜二甲苯中，浸泡10 分钟×3 次；去除多余的液体后，置于无水乙醇中，浸泡3 分钟×3 次；去除多余的 液体后，置于95% 乙醇中，浸泡3 分钟×2 次；去除多余的液体后，置于75% 乙醇中，浸泡3 分钟×2 次；蒸馏水冲洗1 分钟， 置于PBS 缓冲液中。 b) 抗原修复，参见一抗说明书。 c) 阻断内源性过氧化物酶 加入适量的内源性过氧化物酶阻断剂，室温孵育10 分钟；PBS 缓冲液冲洗3 分钟×3 次。 d) 滴加一抗 根据组织大小，滴加100μL或适量的一抗，37℃孵育60 分钟；PBS 缓冲液冲洗3 分钟×3 次。 e) 滴加酶标羊抗兔IgG 聚合物 滴加100μL或适量的酶标羊抗兔IgG 聚合物，室温孵育20 分钟；PBS 缓冲液冲洗3 分钟×3 次。 f) 显色 加入适量新鲜配制的DAB 或AEC 显色液，室温孵育5～8 分钟。 g) 复染 自来水冲洗，苏木素染色液孵育20 秒；分化、冲洗返蓝。 h) 脱水、透明、封片 i) 阅片。 4 、结果判定，染色结果须由有资质的病理医生对染色后的组织片在光学显微镜下观察并进行判读。 【检验结果的解释】 1、抗原修复、孵育时间、温度的修改或使用其他方法均有可能得出错误结果。 2 、在每一次染色过程中，必须有空白对照和阴性对照实验同时进行。 3、如果阳性组织对照不能显示适当的阳性染色，应判定该批次样本的检测结果无效。 4 、若酶标羊抗兔IgG 聚合物孵育温度过高或孵育时间过长，可能导致染色过强及背景染色。 【检验方法的局限性】 1、免疫组织化学染色是一种需通过多个操作步骤完成的检测过程。在组织前期处理和实验过程中的不规范操作，有可 能影响实验结果。 2 、专业的操作人员、经过认证的实验室和标准化的实验流程，可以减少各种外界因素造成的操作偏差。 3、红细胞和细胞色素 C 可能会造成假阳性结果。 4 、阴性结果表示未检出抗原，不一定表示样本中无该抗原存在。待测抗原编码基因变异、抗原低表达或抗原修复不当 等，都会造成抗原无法检出。 5、本试剂仅对10%中性缓冲福尔马林固定石蜡包埋的组织进行了验证，不作其他用途。 【产品性能指标】 1、装量：试剂盒各组份