支原体检测试剂盒.PDFVIP

支原体检测试剂盒 产品系列： 【产品货号】 MB000-1391 1．MB000-1391 48 次 【产品规格】 48 次 2 ．MB000-1392 96 次 【保存条件】 -20℃ 3 ．MB000-1401 with UDG PCR mix 48 次 4 ．MB000-1402 with UDG PCR mix 96 次 【产品组成】 Components MB000-1391 8-cap strips 6 Control template 50ul Cell lysis buffer 5ml 【产品说明】 支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物，估计有15%~35%的细胞被支原体污 染。支原体污染会对细胞造成多方面的影响，包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变， 影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性；支原体难以检测，同时也很难消除，其能轻易地通过0.22 μm标准滤膜，同时 也能拮抗绝大多数的抗生素，给细胞培养造成巨大损失。因此细胞都需要定期（如每2~3个月）进行支原体污染的检测。 许多方法可用于检测支原体，包括肉汤或琼脂培养，直接或间接的荧光染色、ELISA、直接或间接的PCR法等，其中， 直接PCR法灵敏度高。本试剂盒能检测支原体种类包括 M. Hyorhinis, M. Arginini, M.Orale, M. Fermentans, A. laidlawii 等常见支原体，这5种支原体代表了98% 以上的细胞支原体污染。同时还能检测Mycoplasma, Acholeplasma, Ureaplasma, Spiroplasma等种属。 【操作流程】 1、样品准备：在实验前几天，细胞需用无抗生素的培养基进行培养，待细胞生长至80% 以上开始试验。 A、样品为细胞 1、 弃去培养瓶内的细胞培养基。 2、 用DPBS 洗2 次细胞。 3、 加如适量的裂解液（以24 孔板为例，每孔100ul）裂解细胞，室温放置5 分钟。 4 、 收集细胞裂解液，放入离心管中。 5、 细胞裂解液95°C 处理5 分钟。 6、 13000rpm 离心5 分钟，上清转入一只新离心管。 7、 取1~2ul 上清作为模板进行PCR 反应。 B、 样品为培养上清 1、 取1~1.5ml 细胞培养上清，放入离心管中。 2、 13000rpm 离心5 分钟。 3、 弃上清，用DPBS 洗沉淀一次。 4 、 加入100ul 裂解液裂解细胞，上下颠倒混匀后，室温放置5 分钟。 5、 细胞裂解液95°C 处理5 分钟。 6、 13000rpm 离心5 分钟，上清转入一只新离心管。 Web ： Email:tech@ 1 Tel ：+86-21-6983 9301 ，6983 9087 Fax：+86-21-6983 9302 8、 取1~2ul 上清作为模板进行PCR 反应。 2、PCR 反应 本试剂盒提供的8 连管已预加入反应引物，使用前请先离心后小心开启，以免飞扬丢失。以Taq 酶为例，推荐如下： 组分 样品 阳性对照 阴性对照 10×Buffer