猪细小病毒！#基因的原核表达及重组蛋白的复性.PDFVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # #$ ’ #(% 年 月 日 $%% $ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! )*+,-.,/ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 猪细小病毒!# 基因的原核表达及重组蛋白的复性 ， ， # $ # # # $ # 金喜新 ，崔保安 ，魏战勇 ，刘占通 ，王学斌 # （河南农业大学 河南省动物食品安全重点实验室 郑州 !6%%%$ ） $ （河南省畜牧局 郑州 !6%%%2） 摘 要：利用CDE 技术扩增出CCF GH# 基因抗原区。将目的基因与原核表达载体IJ7K3!43# 进行连接并转化，重组 质粒经鉴定并测序。测序结果表明，目的基因插入的位置、大小和读码框均正确，通过试验摸索并确定了表达GH# 基因的最佳诱导条件： 终浓度为 ，诱导时间为 ，温度为 ，其表达量占全菌蛋白的 。表 LC4J #M%88:5N O #% ( P $A M2Q 达产物经HRH3C1J7 分析，得到分子量约为6$SR. 的重组蛋白且以包涵体形式存在。重组蛋白经T*UV*,; +5:V 检测， 结果证明重组蛋白可被CCF 阳性血清识别。用28:5N O 尿素变性溶解包涵体，再用稀释方法和还原型、氧化型谷胱 甘肽系统相结合的方法对重组蛋白进行复性。7OLH1 检测表明，复性后的重组蛋白有良好的生物活性。 关键词：猪细小病毒； 基因；原核表达；变性；复性 GH# 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） H26$ M6 1 %%%#3$%A $%% %#3%#$3%6 猪细小病毒（ ， ）是引起母 检测方法，同时为 重组蛋白作为抗原用于制备 C:,9;* C.,W:W9,-U CCF GH# 猪繁殖障碍的主要病原之一，其特征是母猪妊娠前 特异性单克隆抗体奠定了物质基础。 期受到感染时，经胎盘使胚胎或胎儿受到侵袭，引起 # 材料和方法 母猪流产、不孕、产畸形胎、死胎、木乃伊胎及弱胎 等，另外还可以引起仔猪的皮炎和腹泻，其它类型的 #$ # 材料 ［ ］ 猪感染后无明显临床特征# ’ ! 。 年，国内宋云 病毒、菌株和载体： 株由本实验室 $%%! #$ #$ # CCF XG3# 义等对来自 个猪场的