微波消解-电感耦合等离子体质谱测定 - 海洋科学.docVIP

微波消解-电感耦合等离子体质谱测定 海带中硒的含量＊ 于振花1，2 王小如3 荆淼3 陈登云4 杨黄浩3 黄彦良1 (1中国科学院海洋研究所，青岛 266071) （2中国科学院研究生院，北京 100039） （3国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室，青岛 266061） （4安捷伦公司中国地区，北京 100022) 硒是人体必需的14 种微量元素之一，近20 年来，越来越多的研究发现硒具有清除自由基、抗癌、保护肝脏、防衰老、增强免疫等生物学功能(Bechma,1999;Raymanmp,2000;Cannsa,2000;Cchuff,2004; Sorian,2004)，国内外也通过生物富集的方法相继研制开发了多种富硒食品(Ipcp,1994;胡秋辉等，2000;Finley et al.,2003)。关于藻类对硒的富集研究虽已开展多年，但大部分都集中于微藻上(喻达辉等，2000；王大志等，1997；杨逸萍等，1994)，很少研究大型海藻对硒的富集。作为富含碘的海洋大型藻类，海带具有重要的药用和营养价值，在北方沿海广为种植，但海带的蛋白质含量较低，含硒量也相对偏低（毛文君等，1995）。本实验在亚硒酸钠培养条件下，研究了海带中硒的含量与组成分布特点。 一、材料和方法 1.试剂与样品 HNO3（分析纯硝酸亚沸蒸馏6次）， Agilent多元素混标Part＃5183-4688及内标Part＃5183-4680溶液。过氧化氢，氯仿，甲醇，乙醇，十二烷基磺酸钠，Base-Tris ，HCl均为分析纯，用超纯水配制溶液。标准物质灌木枝叶GBW07603，地矿部物化探研究所。 2.操作参数 BSB-939-IR酸蒸馏纯化器采用德国Berghof公司；Milli-Q超纯水系统：美国Millipore 公司；Speed wave MW-3+微波消解系统：德国Berghof公司；7500a型电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）：美国安捷伦公司；AJ100 型电子天平：瑞士Mettler-Toledo公司。 3.硒海带的培养 参照郑立等（2005）的实验方法，将海带浸泡在含有浓度为（150 mg/l NaNO3，25 mg/l NaH2PO4， 200 mg/l Na2SeO3，）海水的透明玻璃容器中进行富硒培养。实验温度为15～20℃，光照条件为日光灯照射（光照强度为160 μmol/m2s）。培养60 h后取出海带，中间换水2次，用过滤海水清洗、滤纸擦净藻体表面的含硒海水，将海带剪成上部、中部、下部不同的部分，在60℃干燥，粉碎，过60目的筛。 4.带中总硒含量的测定 海带中总硒的测定采用微波消解样品，微波消解样品采用Speed wave MW-3+微波消解系统中自带的LEAF消解程序，按照100oC-180 oC -200oC -210 oC的步骤进行升温，每次升温过程时间为2 min，每个温度下保持10 min，整个消解过程历时48 min。表１是ICP-MS仪器工作参数。 海带样品粉碎后，准确称量0.2g，放入消解罐中，加入5ml高纯硝酸和0.3ml 5mg/L的In内标溶液，虚掩罐盖，放置过夜进行预消解，以排出硝酸与样品反应所生成的气体，然后将消解罐旋紧，放入微波炉中，按照LEAF消解程序设定的步骤进行升温消解，消解结束，待消解罐冷却后，拧开加入1 mlH2O2，待样品变为无色透明溶液后，用超纯水定容至30 g，进行分析。 表1 ICP-MS仪器工作参数 参数 设定值 射频功率 1300 W 采样深度 6.5 mm 辅助气流量 0 L/min 载气流量 1.05 L/min 采样锥 Ni 截取锥 Ni 5.海带中硒的分步提取 参照郑立（郑立等，2005）方法对海带中Se进行分步提取。 （1）在0.5g干海带中加入50ml蒸馏水，添加无水乙醇至终浓度为70％，25℃搅拌12 h，过滤。滤渣依次用50 ml 80％乙醇，50 ml无水乙醇25℃搅拌6 h，滤液合并，30℃旋转蒸发除去乙醇，所剩溶液2000 r/min离心30min，为无机物a加小分子有机物b；沉淀为色素，用CHCl3：CH3OH＝1:1（V/V）20 ml溶解； （2）提取过程的滤渣用CHCl3：CH3OH＝1:1（V/V）（3×50 ml）提取，25℃搅拌12 h，过滤，滤液与I步色素合并，40℃氮吹除去CHCl3/CH3OH，作为脂类c； （3）提取后的滤渣50℃烘干，加入含0.1％ SDS，0.1 mol/L Tris/HCl（pH=9.0）溶液（50 ml×3）提取，25℃搅拌24 h， 4000 r/min离心30min。 二、结果与讨论 1.海带中总硒含量的测定结果（表３） Agilent 7500a型IC