反相C18固相萃取小柱用于蛋白质组分析中少量样品预处理.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 王丹琪 等/反相 C18 固相萃取小柱用于蛋白质组分析中少量样品预处理 1643 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn November 25, 2015, 31(11): 1643−1650 DOI: 10.13345/j.cjb.140622 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 C18 王丹琪，孙伟，邹丽莉，王曌 100005 , , , . C18 . , 2015, 31(11): 1643–1650. Wang DQ, Sun W, Zou LL, et al. Application of reverse phase C18 tip in pretreatment of small amount complex proteomic samples. Chin J Biotech, 2015, 31(11): 1643–1650. 摘 要: 针对少量且复杂蛋白质组样品，开发一种耗时短、操作简便的分离方法。以人的脑海马组织蛋白样 品为研究对象，采用反相 C18 固相萃取小柱，采用不同乙腈浓度对酶切后样品进行梯度洗脱，与反相高效液 相色谱法对比分离效果。通过比较不同乙腈梯度洗脱方案所鉴定到的谱图数、非冗余多肽数、蛋白数和各洗脱 组分间重复率分析，确定一种样品量少、简单易行、分离效果好的实验方案。虽然反相 C18 固相萃取小柱法 鉴定蛋白总数占高效液相色谱法的 85.5% ，但其操作简单，耗时少。通过4 种不同乙腈浓度方案比较，确定乙 腈洗脱浓度优化为 5% 、15%、20%和 90% 时，分离30 μg 人的海马多肽混合物可以得到较优的分离效果。其 蛋白鉴定数为反相液相色谱法的67.0% ，且重复性良好。该结果证实反相C18 固相萃取小柱分离效果比反相高 效液相色谱法稍差，但此方法可以分离少量复杂蛋白质组样品。该方法分离样品充分，操作易行，耗时短，是 进行蛋白质组学分析中少量样品的一个简便预处理方法。 : 反相色谱，C18 固相萃取小柱，乙腈浓度，多肽分离，蛋白鉴定 Received: December 15, 2014; Accepted: January 21, 2015 Supported by: National Basic Research Program of China (973 Program) (Nos. 2013CB530805, 2014CBA02005), Key Basic Research Program of the Ministry of Science and Technology of China (No. 2013FY114100). Corresponding author: Wei Sun. Tel: +86-10 Fax: +86-10 E-mail: sunwei1018@ (973 ) (Nos. 2013CB530805, 2014CBA02005) (No. 2013FY114100) 2015-06-08 /kcms/detail/11.1998.Q1436.005.html 1644 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech November 25, 2015 Vol.31 No.11 Application of reverse phase C18 tip in pretreatment of small amount complex proteomic samples Danqi Wang, Wei Sun, Lili Zou, and Zhao Wang Core Facility of Instrument, Institute of Basic Me