12、色谱法.pptVIP

三、 分离度 塔板理论和速率理论都难以描述难分离物质对的实际分离程度。即柱效为多大时，相邻两组份能够被完全分离。 分离度 分离度: 常用分离度作为色谱柱的总分离效能指标。 定义：相邻两色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽度平均值之比，用R表示。 令Wb(2)=Wb(1)=Wb（相邻两峰的峰底宽近似相等），引入相对保留值和塔板数，可导出下式： R=0.8：两峰的分离程度可达89%； R=1：分离程度98%； R=1.5：达99.7%（相邻两峰完全分离的标准，基线分离）。 讨论： （1）分离度与柱效 分离度与柱效的平方根成正比， r21一定时，增加柱效，可提高分离度，但组分保留时间增加且峰扩展，分析时间长。 （2）分离度与r21 增大r21是提高分离度的最有效方法，计算可知，在相同分离度下，当r21增加一倍，需要的n有效 减小10000倍。 增大r21的最有效方法是选择合适的固定液。 例题1： 在一定条件下，两个组分的调整保留时间分别为85秒和100秒，要达到完全分离，即R=1.5 。计算需要多少块有效塔板。若填充柱的塔板高度为0.1 cm，柱长是多少？ 解： r21= 100 / 85 = 1.18 n有效 = 16R2 [r21 / (r21 —1) ]2 = 16×1.52 ×(1.18 / 0.18 ) 2 = 1547（块） L有效 = n有效·H有效 = 1547×0.1 = 155 cm 即柱长为1.55米时，两组分可以得到完全分离。 计算R 有一根1m长的色谱柱，分离组分1和2 的情况如下： tM=20sec tR1=180sec tR2=196 sec W1 ≈W2 =20sec 求R? 第三节 色谱定性和定量分析 色谱定性方法 1.利用色谱保留参数定性 绝对保留值定性 相对保留值定性 加入已知物增加峰高法 2.与其它方法结合 一定的色谱操作条件下，同一物质具有固定的保留时间。 利用保留值定性：通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中的位置。 不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。 相对保留值 相对保留值r21：相对保留值r21仅与柱温和固定液性质有关，与其它操作条件无关。 在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保留数据，可以用来进行定性鉴定。 该法涉及参比样的选取，一般选易于得到纯物。 加入已知物增高法 当试样中组分较多，操作条件不易控制稳定时，可用此法。 步骤：首先作出被测试样色谱图，然后在试样中加入某已知物，在相同的条件下作色谱图。峰高增加的组分即可能为这种已知物。 与其他方法结合定性 与化学方法结合定性； 与其他分析仪器联用的定性方法。 色谱定量方法 依据：一定操作条件下，检测器的响应值与进入检测器的组分的量成正比。 m i = fi ·Ai 校正因子 f 绝对校正因子f i 主要由仪器的灵敏度所决定,并与分析的操作条件密切相关,不易直接测定. 实际采用的是相对校正因子f i s f i s = f i / fs= （ m i / A i ）/ （ mS / A S ） 测定f值，试剂必须为色谱纯级，若引用文献值则检测器类型和操作条件必须一致。 检测器对各组分的灵敏度不同，因此对峰值必须经过校正。 定量分析方法 内标法 归一化法 外标法 归一化法： 特点及要求： 归一化法简便、准确。 进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大， 仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。 计算公式 例题 用热导检测器分析乙醇、庚烷、苯及醋酸乙酯的混合物。实验测得它们的色谱峰面积各为５.０、９.０、４.０及７.０cm2。按归一化法，分别计算各组分的含量。已知它们的质量校正因子分别为０.６４、０.７０、０.７８、０.７９。 内标法适应性: 样品中某些组分不能完全流出色谱柱 检测器不能对某个组分都产生响应 只需测定其中某些组分含量时 测定方法 准确称取一定量的试样m，准确加入一定量内标物mS, 测量色谱图上待测组分峰面积A i 及内标物峰面积A S . 计算公式: 例题—无水乙醇中微量水分的测定 　准确称量被测无水乙醇100ml,称重为７９.７３克．加入无水甲醇（内标物）约０.２５７２克，混允．测得数据