白色噬琼胶菌QM38β-琼胶酶基因agaD02的克隆与表达.PDFVIP

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2017-06-26 发布于江苏
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白色噬琼胶菌QM38β-琼胶酶基因agaD02的克隆与表达.PDF

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白色噬琼胶菌QM38β-琼胶酶基因agaD02的克隆与表达

白色噬琼胶菌QM38 β-琼胶酶基因agaD02 的克隆与表达 1 2 2 1 2 王静 , 马吉飞 , 苗婷婷 , 李兆杰 , 杜宗军 (1. , 264200; 2. , 264209) 摘要: 从白色噬琼胶菌(Agarivorans albus ) QM38 基因组中扩增到一段编码 β-琼胶酶的 DNA 序列, 命名为 agaD02 。序列相似性分析的结果表明, 基因 agaD02 和弧菌 Vibrio sp. JT0107 及 Vibrio sp. PO-303 的琼胶酶基因具有同源性, 其相似性程度分别为 98.7%和 97.4%, 而同GenBank 中的其他序列同源性很低。对此基因的序列进行了分析, 结果表明, 其开放阅读框长度为 2 868 bp, 编码的蛋白质包含 955 个氨基酸, 在蛋白数据库中的编号为 ABM90422, 推测其分子质量为 106 ku, 等电点为 4.87 。利用网上数据库资源和生物学软件对预测的琼胶酶蛋白序列进行了同源性分析和结构分析。设计两端含酶切位点的特定引物, 克隆 agaD02 基因, 构建入表达载体pET24a(+), 转化大肠杆菌 BL21(DE3), 转化后提取质粒进行酶切和电泳验证, 转化后的大肠杆菌经诱导可产生胞外琼胶酶。关键词: 琼胶酶; 白色噬琼胶菌(Agarivorans albus ); 克隆; 序列分析; 表达中图分类号: Q936 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2010)08-0006-05 () , , , , 3 , 1993 , Sugano [6] JT0107 agaA Ohta [7] , Agarivorans sp JAMB-A11 β- ; , Dong [8, 9] [1] , Vibrio sp. Strain PO-303 agaA agaC [2, 3] : α-(EC3.2.1.-), 2007 , Dong [10] Vibrio sp. PO-303 α(1→3) , (agaroo- AgaD ligosaccharides); β-(EC1)D-  3,6--α-L-β(1→4) , (neoagarooligosaccharades) , QM38 , , 16S rDNA , , (Agarivorans albus )[11] , 2004 [12] , , (Agarivorans albu