16S核糖体核糖核酸基因突变及外膜通透性降低乃幽门螺旋杆菌对四环.PDF

中文題目： 16S 核糖體核糖核酸基因突變及外膜通透性降低乃幽門螺旋桿菌 對四環黴素抗藥性之可能機轉 英文題目：The mechanism of tetracycline resistance in H.pylori- alternation of 16S rRNA encoding gene and decreased outer membrane permeability 作 者：吳政毅 Kwon DH* 吳登強 王文明 詹昌明 Graham DY* 服務單位：高雄醫學大學設附中和紀念醫院 胃腸內科 *Department of Medicine, Baylor College of Medicine, Houston Texas, USA 前言 : 幽門螺旋桿菌與多數上消化道疾病有關，如消化性潰瘍、慢性胃 炎、胃癌等，因此幽門螺旋桿菌的治療也已被重視。目前的治療以三合療 法(一種氫離子幫浦阻斷劑加上兩種抗生素)為主。而目前治癒率下降的趨 勢，主要乃因抗藥性幽門螺旋桿菌的出現。因此第二線根除療法也常在第 一線療法失敗後使用。其中四環黴素為常使用的第二線抗生素之一，然而 四環黴素的抗藥性機轉卻鮮少被討論。因此本研究的主要目的乃在探討幽 門螺旋桿菌對四環黴素抗藥性之可能機轉。 材料及方法: 在 1999 年-2000 年間從胃組織切片培養所得的幽門螺旋桿菌 進行瓊脂稀釋抗藥性試驗，找出對四環黴素最小抑菌濃度(MIC) 大於或等 於 4毫克 /升的菌株，並利用以下方法研究可能的抗藥性機轉 1). 分離及純 化其核糖體核糖核酸，以進行四環黴素 -核糖體核糖核酸親和力分析 2). 純化其去氧核糖核酸並利用多聚合脢連鎖反應，檢測 16S 核糖體核糖核酸 基因的突變與否 3).純化其外膜蛋白並進行 SDS電泳以分析可能的 變異 4).並藉由細菌內四環黴素累積試驗，研究外膜通透性對於四環黴素 抗藥性可能的影響。 結果 : 在 227位病人中有 9位 (4%) 分離出幽門螺旋桿菌抗四環黴素菌株， 最小抑菌濃度介於 4 到 32毫克 /升之間，16S 核糖體核糖核酸分析發 現在 其四環黴素的接合位置共 有四種單一核甘酸變異， 即( AGA965-967 tGA ， AGt ，AGC ，gGA) 。經由四環黴素 -核糖體核糖核酸親和力分析的研究， 發 現這些變異可使四環黴素與核糖體核糖核酸親和力降低 40% 。利用這些 單一核甘酸變異的多聚合脢反應片 段所 產生的自 然轉形子代 ，其最小抑菌 濃度較 其母代亦有上升之 情形 。另 有 3 抗菌株其 16S 核糖體核糖核酸四環 黴素的 接合位置 並無變異，顯示可能有其 他的機轉 造成 抗四環黴素的抗藥 性。經由細菌內四環黴素累積試驗發 現四環黴素在菌內的累積較敏感 性菌 株為低，更經由 SDS電泳發 現其外膜蛋白 表現 形態與敏感 性菌株 不同 顯示。 外膜蛋白改 變所造成的外膜通透性降低使細菌內四環黴素累積 減低可能 亦為幽門螺旋桿菌對四環黴素抗藥性重要機轉之一。 結論 :因此從 吾 人的研究顯示 在幽門螺旋桿菌四環黴素抗藥性的複雜 機 轉中，可能的 成因，除 了與 16S 核糖體核糖核酸的變異有關外，另 外也可 能與外膜蛋白的 不同 ，使四環黴素的通透性降低，並減 少細菌內的藥物累 積而 達成 其抗藥性。