组织工程与动物细胞的三维培养(研究生课程).ppt

组织工程与动物细胞的三维培养 1.组织工程的基本原理与方法 将体外培养扩增的正常细胞吸附在一种生物相容性良好、并且可被机体吸收的生物材料上，形成细胞与生物材料的复合物。 将此复合物植入体内，形成新的具有相应形态与功能的组织、器官，以达到修复创伤与重建功能的目的。 组织工程研究示意图 2. 组织工程的研究内容 组织工程是一门多学科交叉的科学，包含细胞生物学、分子生物学、材料学、工程学、临床医学、伦理学等多个学科的内容。 组织工程研究包括种子细胞、生物材料、组织器官的构建、临床应用四个主要环节。 3. 组织工程的研究意义 组织工程是继细胞生物学与分子生物学之后，生命科学发展史上又一个新的里程碑，标志着医学将走出器官移植的范畴，步入制造组织和器官的新时代。 组织工程研究的拓展，还可用于以哺乳动物作为研究对象的基础研究体系，所建立的三维组织培养模型可用于研究疾病的发生、发展过程，组织工程与转基因技术的结合，还可用来生产内源性药物，或作为药物试验的体外模拟系统。 4. 组织工程研究进展 软骨的组织工程：软骨由单一细胞构成，因而软骨的组织工程首先取得突破。 骨的组织工程：已再生了带血管的骨组织并用于修复缺损。 目前的研究集中在: a:骨组织诱导：使用一种多孔性、可降解的支架（如生物陶瓷、聚延胡素酸丙烯（PPF））来充填缺损，该支架具有骨诱导能力，即诱导成骨细胞及其他细胞长入支架内，逐渐形成骨组织。 b:细胞传输：采用细胞传输物质（如多聚α—羟化酯，PLA、PGA及其双聚物等）促进骨组织生长及分泌细胞外基质（extracellular matrix, ECM） 肌腱及骨骼肌的组织工程：已在裸鼠中再生小牛肌腱组织，并达到正常肌腱30%的拉力。成肌细胞的种植已取得进展。 皮肤的组织工程：来源于新生儿包皮的成纤维细胞经多次传代，已建立细胞库。将细胞接种到尼龙网上，形成人工真皮(dermagraft) ，表面粘贴一层薄的硅胶膜以充当人工表皮。 周围神经的组织工程：雪旺细胞的培养与种植，目前尚无合适的生物材料。 肝脏的组织工程：将肝细胞接种在可降解的聚合物材料上，形成人工肝脏（肝细胞——材料复合物），植入体内。 胰腺的组织工程：取材与培养难度较大，胰腺细胞必须置于一层聚合物的膜囊中培养。初步研究表明，将胰岛细胞与生物材料制成的包囊置入狗、小鼠腹腔中，可降低血糖，并维持60-150天。 5、组织工程中的新领域——微重力组织工程 （1）常规（二维）培养方法的局限性 采用静止培养时，由于培养容器中的营养物质、气体及代谢产物浓度不均一，因而细胞只能呈单层生长，细胞密度低，无分化现象； 采用搅拌式发酵罐培养虽然可以克服静止培养的缺点，但由于培养液被搅动时产生的高剪切力，极易导致细胞损伤，并抑制细胞的组织特异性分化。搅拌培养一般只能获得直径在1mm以下的多细胞球状体，细胞呈现轻度分化，细胞球状体中心常出现坏死细胞； （2）微重力组织工程的产生背景 80年代末，美国航空航天局（NASA）在开展空间生物学试验时，为了保护细胞培养物免遭航天飞机起飞与降落时产生的巨大剪切力的损伤，由John Space Center 的 Ray Schwarz等设计研制出一种转壁式生物反应器（Rotating Wall Vessel Bioreactor, RWVB）； 采用RWVB进行地基试验时，意外地发现离体细胞在RWVB中呈现高密度聚集，并形成较大的组织样结构； 这一令人振奋的结果促使NASA进一步开展了微重力条件下细胞培养的研究，由此揭开了微重力组织工程的新篇章。 转壁式生物反应器(RWVB) （3）微重力三维培养的原理 将细胞与培养液置入内、外圆柱体之间，整个装置绕纵轴旋转，根据细胞或培养物的大小调节容器的旋转速度，使培养物长时间保持悬浮状态。 由于在旋转过程中正常的重力向量被持续随机化，使细胞处于一种模拟自由落体状态，在一定程度上类似于微重力环境，因此称之为模拟微重力，以与在太空飞行时的微重力环境相区别。 据计算，RWVB产生的模拟微重力平均为10-2g，在近地轨道空间站飞行时微重力为10-4-10-6g。 RWVB的特点 低剪切力对细胞无机械损伤，充氧不引起涡流，物流转移率高； 随机化的重力向量可能直接影响基因表达，或者间接促进细胞的自分泌／旁分泌，有利于细胞间的信号转导； 细胞在RWVB中有一定程度的三维空间自由，有利于细胞与细胞、细胞与基质之间按组织学特性相互接触，有利于细胞分化，且不易形成坏死中心。 （4）微重力组织工程的特点及其意义 微重力组织工程（Microgravity Tissue Engineering）是近年来由美国空间生物技术研究人员开创的一个独特研究领域，其核心技术是建立动物细胞的三维（Three Dimension）培养体系。 研究