免疫介导的运动神经元损伤模型中血清和脑脊液氨基酸的测定.pdfVIP

中文摘要 用PBS皮下注射豚鼠。免疫后观察豚鼠肢体活动情况，进 行神经功能评估。每周称体重，每4周做肌电图。当豚鼠出 现肢体无力时停止免疫，当动物不能翻身时取材，从眼内眦 或心脏抽血放入4℃冰箱，静置过夜后离心，抽取上清；从 小脑延髓池抽取脑脊液。血清和脑脊液放入一70℃冰箱保 存。ELISA检测血清中IgG水平。取新鲜股直肌肌肉作肌 活检。用4％多聚甲醛一O．05％戊二醛一0．2％苦味酸固定液 灌注后取脊髓颈、腰膨大后用相同的固定液后固定3天。颈、 腰膨大做脏、甲苯胺蓝染色观察运动神经元数目、神经元 变性情况以及IgG免疫组化染色观察脊髓运动神经元内有 无IgG沉积。 2免疫介导的运动神经元损伤模型中血清和脑脊液氨 基酸含量的测定 应用高效液相色谱分析仪检测正常对照组、免疫对照组 与免疫组豚鼠血清和脑脊液中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、 Y一氨基丁酸含量，结果用均数±标准差来表示。用t检验 分析不同组间四种氨基酸浓度。检验水准0c=O．05。 结果：1成功建立免疫介导的运动神经元损伤模型 免 疫组豚鼠9只出现肢体瘫痪，肌张力减低，体重减低，肌电 图表现为失神经支配，颈、腰膨大示前角灰质运动神经元变 性，数量减少。肌肉活检提示神经源性肌萎缩，ELISA测 定血清IgG水平增高。脊髓免疫组化发现前角运动神经元 内IgG沉积。正常对照组和免疫对照组均未出现上述改变。 2以正常对照组豚鼠血清和脑脊液的四种氨基酸浓度 作为基础值，免疫对照组与正常对照组四种氨基酸均无统计 学差别，免疫组瘫痪豚鼠血清和脑脊液谷氨酸、天冬氨酸升 2 中文摘要 高，甘氨酸、丫一氨基丁酸与正常豚鼠和免疫对照组无统计 学差别，尸O．05。 结论：应用牛脊髓前角灰质匀浆免疫豚鼠，造成豚鼠肢 体瘫痪，脊髓前角运动神经元变性、坏死，神经元数量减少， 从而成功建立了免疫介导的运动神经元损伤模型，通过测定 免疫豚鼠血清和脑脊液中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、Y 一氨基丁酸含量，发现免疫组瘫痪豚鼠血清和脑脊液中谷氨 酸、天冬氨酸增高，对照组不增高，提示氨基酸的兴奋毒作 用可能参与了免疫诱导的运动神经元损伤过程。 关键词：肌萎缩侧索硬化；免疫介导；谷氨酸；高效 液相；豚鼠 in acids amillo andCSF serum of contents on Study model neuron motor mediated damage t11eimmune ABSTRACT sclerosis is a lateral (ALS) obiective：Amyotrophic both．upper inVolVlng disease， neurodegener