新型细胞芯片的构建及初步应用.pdfVIP

分群。可以按照不同临床需要，设计不同的抗体组合，进一步降低 成本，提高疾病的检出率，更好的为广大的病人服务。 材料与方法 要固定于醛基玻片上，形成微阵列，构建出细胞芯片A、细胞芯片 B(白血病免疫分型)和细胞芯片C(淋巴瘤免疫分型)三种细胞芯 片。从20例健康志愿者、20例淋巴细胞白血病病人O．5一lml全 血中和20例淋巴瘤病人胸水中分离出的单个核细胞，其中一部分 用丫啶橙预染5rain，经PBS洗涤3次后与细胞芯片杂交，与细胞 芯片杂交，形成特异性选择细胞群。将杂交后的细胞芯片进行胎 色荧光染色、巴氏染色等并观察结果。 结 果 该芯片能选择性的结合不同免疫表型的细胞。胎盘兰染色显 示活细胞数95％；瑞氏染色细胞形态良好，杂交点边缘整齐，背 景干净；荧光染色显示特异性良好。急性淋巴细胞白血病病人与 健康志愿者的淋巴细胞免疫表型有十分明显的差别，T淋巴细胞 HL～一DR+，并显示了明显的单克隆增生的恶性肿瘤的性质，符 合临床诊断。淋巴瘤病人胸水中有大量幼稚淋巴细胞，其中3例 例CD22+，属B细胞淋巴瘤，阳性点上的细胞与非阳性点上细胞 无论在细胞数量、细胞大小、形态规则性上都有明显的不同，用显 ·2· 微镜观察更是明显。I尸7 ／’ 结 论≥ j众所周知，形态学在细胞学检查中的重要作用是任何一种方 法取代不了的。可以看到，我们的细胞芯片所捕获的细胞很均一， 纯度高，而且是单层细胞，十分严格的被限定在特异性区域。通过 扫描电镜的观察，细胞保存十分完好，能清楚的看到淋巴细胞膜上 的皱褶和刺状突起，所以可用于进行更为深入的研究。在一张小 小的玻片上可以根据需要排布多种抗体，能将细胞自动分成不同 类群。本实验方法所需的细胞数量要比L撕ssa的要少得多，因为 他的试验样品的细胞在6×108／L时，很少甚至没有杂交信号被检 测到。我们的试验可以使细胞的量减少到107／L或更少，只要增 加摇晃次数就可富集同类细胞。尤其对于象血液、胸腹水等细胞 种类很多的细胞悬液，十分有效。即使细胞数量很少，所产生的信 号不足以被仪器扫描到时，也可以使用普通光学显微镜直接观察 结果。，奉实验是利用了蛋白质的氨基端(NH：)可与醛基(CHO) 发生共价结合，将蛋白质固定在醛基玻片上，在玻片上形成CD抗 体微矩阵。我们选用玻片做为载体，使操作简单易行，它的突出优 点透明性好，可以用普通光学显微镜直接观察细胞形态，实现了免 疫学与形态学相结合。本实验所构建的细胞芯片在自血病免疫分 型中应用的优势是十分明显的。急性白血病是一种单克隆增生性 疾病，由于某种原因，某一蛋白大量增生。大量异常细胞仅集中在 某一抗体点上，而其它点上虽然也有少量细胞，但经形态观察，还 是属于正常细胞。异常增生的肿瘤细胞无论在细胞体积、外形规 则性上与正常细胞都有十分明显的区别，即使是经验不太丰富的 检验人员也能判断出结果。用扫描仪扫描检测可以实现高通量结 果输出，对于白血病病人的检测结果很明显。由于细胞活性良好， 特异性高，可以成为一种研究平台，在制药及基因工程领域也将有 ·3· ／ 很高的应用价值。f我们这种细胞芯片构建的成功使我们相信，在 不久的将来，细胞志片必将发挥其巨大的作用。fLY、一 关键词 细胞芯片；CD抗体；白血病免疫分型；淋巴瘤免疫， 理； -d· ConstructionofNew Cell Microarray and Clinical Application Abstract objective