波尔山羊耳成纤维细胞核移植的研究.pdfVIP

渡尔山羊耳戒纤维缅施核移楂韵研究 波尔山羊耳成纤维细胞核移植的研究 摘要 核移接技术不仅是研究细聪核与缨胞质耀互作用鲍霪要手段，藤且是在医学积 农数等镁域都将有饕广泛应月懿景的一颁重要题黪工程技术。本实骏用波尔出羊耳 皮默残纤维纲跑进行核移撞职究，建立了耱应韵核移植技术程序，如露定针靼注射 针熬制{乍，朔母缨鼹的体乡}塔葬，戏熬努母缓臆鹩去核，波尔由羊群皮获成纤维绍 缒移入去核羚母缩稳静静焉踩，去拔奔母缩糙一液尔由荸耳皮默藏纤维纲脆复合体 豹宅融合，燕经坯的激滔帮培养等。 结栗表靖： 1．甭翻黼法采集不同季节辫宰由羊卵巢卵蹲细胞，结巢繁殖季节卵巢采集到可用 母细胞0．49枚／卵巢(198枚／405卵巢)。不阍季节采集的卵母细胞数差异显著。 结果显示，繁殖季节屠宰山羊的卵巢可采集到更多的可用卵母细胞。 M199+IIIJ 2．对不同卵母细胞成熟培养系统的效果进行比较分析，表明在系统I 1713--E。+lOmg／mlBSA中卵母细胞成熟率达88．8％，在系统II hCG+lug／m1 M199+1IU hCG+lug／ml M199+1Iu 17 hCG+lug／mlB-E一10％FBS中卵母细胞成熟率为27．9％，可见系统 I具有较高而稳定的成熟率，是一种较理想的无血清培养系统。 3．卵泡的直径大小对卵母细胞的成熟培养有一定的影响，实验表明直径在2-5mm 卵母细胞的成熟率只毒3．j％(3／80)。 4．卵丘细胞的存在对郛母纲跑的发育成熟鸯重攫的影响，鸯三层以上卵丘缨黪包 裹我卵母缨胞戏熟搴达89。4％(t61／180)，半襁襄释裸卵懿戏熬率分别为 46。7％(28／60)积0(0／30)。 5，将繁殖季节采集鼓2140牧郛丘一郛鹫缨耱复合体鼹予体夕}成熬培养，成熟率为 35．5％(71／200)。结巢表谤，不溺季节采集韵郭霉细胞俸矫成熬率有爱著差异。 6．在俸缅施的培养中，建立了渡尔由羊耳瘦肤艘纤维细胞韵培养程序，获得了波 尔由羊耳皮获成纤维细胞的传代培养物，以此作为山羊体细胞核移植的供体缅 脆。糯作核供体的体细胞在进行核移植前，培养液的廊清浓度从1096阵至0．5％， 波尔山羊耳成纤维细胞核移植的研究 从而诱导波尔山羊耳皮肤成纤维细胞处于细胞周期的Go期。 7．在培养皿中用斜口拔尖的针对卵母细胞进行去核，并用同一根针将波尔山羊耳 皮肤成纤维细胞移入卵母细胞的卵周隙，会节省体外操作的时间，有益于胚胎 的发育。 数。 是6．3％(7／111)。结果表明后两种方法都能用来激活重组胚。本实验研究表明， 山羊一兔异种核移植胚、山羊一山羊同种核移植胚卯裂率分别是24．9％(41／165) 和27．1％(52／192)，虽然山羊一兔异种核移植胚能发育到桑葚胚，但发育率 [4．9％(2／41)]显著低于山羊一山羊同种核移植胚[9．6％(5／52)]。 结果表明在加入卵丘细胞的系统中桑葚胚发育率高。 关键词：核移植：卵母细胞；融合；激活；培养 分类号：0813．2 ． …．鍪叠些整曼蹩簦篓塑盟煞堡塑堕受熬． …—— G_咚；lfrom Nuoleartransferoffibrob；ast goat AbstFact forthe 髓】cleartransfer is stn毋of techniqueimportant#etonly