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动植物检验检疫实验 实验一 凝集反应 【实验目的】 　　1．了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。 　　2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和结果分析。 　　在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。 玻片凝集试验——ABO血型鉴定 　　玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。 【实验原理】 　　人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 　　　　　　ABO血型的划分 【实验材料】 　　1．ABO血型鉴定试剂盒　内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。 　　2．一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75％酒精、灭菌棉签。 　　3．84消毒液 　　 3．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血 液加入抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血。 4．观察红细胞有 无凝集发生。如 有凝集，可见红 细胞凝集成块； 无凝集，红细胞 呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。 【思考题】 什么叫凝集反应?直接凝集试验和间接凝集试验各有何特点？各有何实际意义（用途）？ 实验二 沉淀反应 【实验目的】 1．了解沉淀反应的原理、基本类型及其在动植物检验检疫中的意义。 2．熟悉琼脂单向扩散的基本原理、方法、结果分析及用途。 【实验原理】 在含有特异性抗体的琼脂板中打孔，并在孔中加入适量的抗原，当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，即形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度成正相关。 【试剂与器材】 1. 人IgG干粉。 2.羊抗人IgG免疫血清。 3. 1.5%食盐琼脂。 4. 水浴锅、载玻片、打孔器、微量加样器等。 【操作方法】 1. 配制生理盐水琼脂 2. 制备特异性抗体的琼脂板 3.用直径3mm打孔器在琼脂板上打孔，孔间距为1.2～1.5cm。 4.向上排各孔分别加入人血清蛋白（用生理盐水稀释）,每孔加10μl。 5.把已加样的琼脂板置于湿盒内37℃温箱培养，24小时后观察结果。 【实验结果】 24小时后,观察结果并作记录. 【思考题】 什么叫沉淀反应?单向琼脂扩散和双向琼脂扩散各有什么特点？各有何实际意义（用途）？ 实验三 植物病原真菌的分离培养以及临时玻片的制备 一、实验目的 1. 学习植物病原真菌分离培养的原理和常用的方法。 2. 初步掌握临时玻片的制备以及绘制病原菌草图技术 关于柯赫氏证病法则 (Koch′s postulate) 　　1882年，柯赫(Koch)在研究了人和动物的病害之后，提出了确定一种微生物致病性的三个必要条件：(一)这种微生物经常与某种病害有联系，发生这种病害往往就有这种微生物存在；(二)从病组织上可以分离得到这种微生物的纯培养，并且可以在各种培养基上研究它的性状；(三)将培养的菌种接种在健全的寄主上，可诱发出与原来相同的病害；史密斯(Smith)在1905年又补充以下一条，(四)从接种后发病的植物上，能再分离到原来的微生物。　 二、植物病原菌分离培养的原理和常用的方法 1. 植物病原菌分离培养的原理 采用组织分离法或稀释分离法将某种特定的病原微生物与混杂在一起的其他微生物分开，并将其接种于营养适宜的基质中培养，获得这种纯培养物。 植物病原菌分离培养的常用的方法 病原菌分离的方法因材料不同而异，植病实验室最常见的方法有组织分离法和稀释分离法两种。　　1、组织分离法：这种方法适用于大部分病菌的分离，此法又分为小块组织分离和大块组织分离两种方法。 操作步骤： # 培养皿的准备 # 培养皿平板制作 # 切取病组织小块 # 表面消毒 # 用无菌操作法将病组织小块移至培养基平面上，每皿放3—4块 # 翻转培养皿，放入26-28℃恒温温箱内培养，3-4天后观察结果 # 选择菌落移至斜面保藏并制片镜检 2.稀释分离法： 稀释分离法适用于细菌、土壤菌及产生孢子多的真菌等病原菌的分离. 3、划线分离法 4. 点植法 在放大镜的观察下，用无菌镊子夹取一段待分离的真菌菌丝成一个孢子直