白藜芦醇对人宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞增殖与凋亡的影响论文.docVIP

　　白藜芦醇对人宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞增殖与凋亡的影响论文 申新 于良 张靖 李胜男 潘承恩 【摘要】 目的： 探讨白藜芦醇(Res)对宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞增殖与凋亡的影响. 方法: MTT法检测不同浓度Res对C33A，SiHa和HeLa细胞的抑制率. 流式细胞仪检测细胞的凋亡率及细胞周期. 荧光显微镜观测凋亡细胞. 结果: Res在一定浓度范围内，以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌C33A，SiHa 和HeLa细胞的生长（P 0.01）. 荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变. Res对细胞周期无明显影响. 结论： Res通过诱导细胞凋亡以时间依赖和浓度依赖的方式抑制宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞的生长. 【关键词】 白藜芦醇；宫颈肿瘤；细胞凋亡；细胞增殖 0引言 白藜芦醇（Resveratrol, Res）是广泛存在于葡萄、果类、虎杖等多种食物、药用植物中的一种多酚类化合物. 研究表明，Res具有广泛的预防和抗肿瘤作用，它对白血病、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、结肠癌、鼻咽癌、喉癌、甲状腺癌等多种癌瘤细胞具有明显的抑制作用［1-6］. 但目前对Res抑制宫颈癌的研究还远未深入. 宫颈癌(cervical cancer)是最常见的女性生殖道肿瘤.freelan papilloma virus HPV）感染密切相关，本实验选择3种宫颈癌细胞株，即宫颈腺癌细胞株HeLa、宫颈鳞癌细胞株SiHa和C33A，其中HeLa和SiHa为 HPV阳性的细胞株，C33A为HPV阴性的细胞株. 研究Res对人宫颈癌细胞株的增殖与凋亡的影响，旨在探讨Res对宫颈癌潜在的治疗作用. 1材料和方法 1.1材料人宫颈癌细胞株C33A，SiHa和HeLa由西安交通大学医学院实验医学中心惠赠；Res购自Sigma公司，纯度99%；RPMI1640培养基购自Invitrogen公司；MTT购自Amressco公司；DMSO购自天津巴斯夫化工有限公司；Annexin V荧光试剂盒购自晶美生物技术有限公司. 1.2方法 1.2.1细胞培养人宫颈癌C33A，SiHa和HeLa细胞，在含100 mL/L胎牛血清，1×105 U/L青霉素、链霉素的RPMI1640培养液中，37℃，50 mL/L CO2保持饱和湿度培养. 1.2.2MTT法检测不同浓度Res对C33A，SiHa和HeLa细胞的生长抑制作用取处于对数生长期的C33A，SiHa和HeLa细胞，调整细胞密度为(6~8)×107/L，接种于96孔板，每孔100 μL，细胞贴壁后，实验组加入不同浓度的Res 100 μL，使其终浓度分别为12.5，25，50，100，200，300，400，600 μmol/L；同时设置空白对照组、溶剂对照组和调零孔，每个剂量设3个平行孔. 培养板放回孵箱继续培养24，48，72 h. 取出培养板，每孔加入新鲜配置的MTT 20 μL（浓度为5 g/L），继续培养4 h，吸弃上清液，加入DMSO 150 μL，在平板摇床摇10 min（60次/min）后，用酶联仪于490 nm处测出个孔吸光度值（A 值）. 细胞抑制率（%）=（1-实验组A值/对照组A值）×100%. 实验重复3次. 1.2.3流式细胞仪（FCM）Annexin V荧光染色检测细胞凋亡以0，200，300 μmol/L Res处理细胞48 h，分别消化收集各组细胞，调整细胞密度至1×1010 /L各取100 μL；PBS洗涤2次后，弃上清液；加入500 μL结合缓冲液悬浮细胞；加入5 μL Annexin VEGFP混匀后，加入5 μL PI，混匀；室温、避光染色15 min后，进行荧光显微镜和流式细胞仪的观察和检测，分析细胞凋亡的百分比. 实验重复3次. 1.2.4流式细胞仪PI染色检测细胞周期 消化收集各组细胞，培养24 h，再将细胞饥饿24 h（即加入不含血清的培养液）后，以0，200，300 μmol/L Res处理细胞48 h，分别消化收集各组细胞，调整细胞密度至1×1010/L各取100 μL；PBS洗涤2次后，弃上清液；加入预冷的700 mL/L乙醇固定1 h，离心，PBS洗涤2 次，加入RNAase，37℃水浴30 min后加PI染色15 min，离心后流式细胞仪检测细胞周期. 实验重复3次. 1.2.5荧光显微镜观察将300 μmol/L Res处理细胞48 h后染色：加入5 μL Annexin VEGFP，10 μL PI混匀，室温、避光反应15 min. 进行激光共聚焦显微镜下凋亡细胞形态检测与观察. 统计学处理：所有数据用x±s表示，采用方差分析进行组间比较分析. P 0.01为差异有统计学意