白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶9表达的影响论文.docVIP

　　白藜芦醇对肝癌细胞基质金属蛋白酶9表达的影响论文 余海波, 潘承恩, 吴武军, 赵四海, 张慧峰 【摘要】 目的：观察白藜芦醇（resveratrol, Res）对体外人肝癌细胞系SMMC7721细胞增殖及基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase9, MMP9）表达的影响，初步探讨Res抑制肝癌细胞侵袭转移的机制。方法：应用不同浓度的Res分别作用于人肝癌细胞系SMMC7721细胞24、48和72 h，采用甲基噻唑基四唑比色试验（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）观察Res对SMMC7721细胞增殖的影响；反转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RTPCR）检测MMP9 mRNA的表达；蛋白印迹分析（MP9蛋白表达情况。结果：Res对SMMC7721细胞有增殖抑制作用，且呈量效和时效关系；经Res作用后，SMMC7721细胞MMP9 mRNA和蛋白表达均明显下降（P＜0.05）。结论：Res对肝癌细胞的生长具有抑制作用，且能下调其MMP9的表达，可能具有抑制肝癌细胞侵袭转移的作用。 【关键词】 白藜芦醇; 肝癌; 基质金属蛋白酶9 Objective: To observe the effects of resveratrol on proliferation of human hepatocellular carcinoma cell line SMMC7721 cells and expression of matrix metalloproteinase9 (MMP9) in vitro. Methods: SMMC7721 cells ethyl thiazolyl tetrazolium (MTT). The expression of MMP9 mRNA ined by reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR). MMP9 protein edependent effects. Moreover, both MMP9 mRNA expression and MMP9 protein production arkedly reduced after resveratrol treatment. Conclusion: Resveratrol can inhibit the proliferation of SMMC7721 cells and doed that resveratrol may suppress the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma. Keyatrix metalloproteinase9 原发性肝癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，术后5年生存率低.freelatrix metalloproteinase9,.freell青霉素和100 U/ml链霉素的RPMI 1640培养液中，在37 ℃、5% CO2及完全饱和湿度条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。 1.1.2 试剂 Res购自美国Sigma公司；优级新生牛血清，购自兰州民海生物工程有限公司；RPMI 1640培养基，购自美国Gibco公司；逆转录试剂盒、PCRMix及蛋白marker购自Invitrogen公司；鼠抗人MMP9抗体购自美国Neomarker公司，羊抗鼠二抗购自深圳晶美公司。 1.2 实验方法 1.2.1 甲基噻唑基四唑比色试验 取对数生长状态良好的SMMC7721细胞，制备细胞悬液，调整细胞浓度后加入96孔板，使每孔细胞数达到5×103，培养24 h贴壁后无血清培养基同步培养24 h。然后加入终浓度分别为10、50、100、200、500 μmol/L Res的RPMI 1640培养基，并同时设空白对照孔和阴性对照孔，每组设4个复孔。作用24、48、72 h后，每孔分别加入5 mg/ml甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）20 μl，37 ℃孵育4 h，弃上清，每孔加入150 μl二甲基亚砜。平板摇床轻微振荡10 min使结晶溶解，应用BioRad全自动酶标仪于波长490 nm处测得每孔的吸光度（optical density, OD）。实验重复3次。计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率=［1－（实验组OD－空白对照组OD）/（阴性对照组OD－空白对照组OD）］×100%。 1.2.2 反转录聚合酶链反应 SMMC