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实验二 脑脊液显微镜检查 【目的】 掌握脑脊液显微镜检查，包括细胞总数计数、白细胞计数和白细胞分类计数的方法。 【操作】 一、细胞总数计数 （一）直接计数法 1. 充池 2. 计数 3. 计算 （二）稀释计数法 1. 稀释标本 2. 充池 3. 计数 4. 计算 二、白细胞计数 （一）直接计数法 1．除去红细胞 2．充池 3．计数 4．计算 （二）稀释计数法 1．稀释破坏红细胞 2．充池 3．计数 4．计算 三、白细胞分类计数 （一）直接分类法 白细胞计数后，将低倍镜转换为高倍镜，根据细胞形态和细胞核形态进行直接分类。分别计数单个核细胞（淋巴细胞、单核细胞、内皮细胞）和多个核细胞(粒细胞系)，共计100个 (包括内皮细胞)，并以百分率表示。如白细胞不足100个，应直接写出单个核细胞和多个核细胞的具体个数。 （二）涂片染色分类 若直接分类不易区别细胞时，可将脑脊液以1 000r/min离心5min，取沉淀物制成均匀薄片，置于室温下或37℃恒温箱内尽快干燥，瑞氏或瑞—吉染色后，油镜下进行分类计数，结果报告与外周血白细胞分类计数报告方式相同。激活型单核细胞(比普通单核细胞大；胞质边缘呈花边状，胞质内有空泡) 、转化型淋巴细胞(形态似异型淋巴细胞)及室管膜细胞(形态似大淋巴细胞)应计入分类的百分比中。 【注意事项】 1. 标本 （1）应避免标本凝固，遇高球蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。 （2）标本采集后应在l h内进行细胞计数，若放置太久，细胞可能凝聚成团或破坏，病原微生物死亡，影响检查的结果。 （3）脑脊液检查脑膜炎奈瑟菌时，因该菌对外界环境和理化因素的抵抗力弱，标本采集后应立即送检或37℃预温送检，或者床边接种标本。 （4）若标本陈旧、细胞变形时，白细胞直接分类法误差大，应改用涂片染色分类法分类计数。 （5）陈旧性标本不宜应用血液分析仪计数法。病理性、陈旧性标本中的组织和细胞碎片以及细胞变形等可影响细胞分类，结果重复性、可靠性欠佳；蛋白质含量高，尤其有凝块的脑脊液标本容易使仪器堵孔，故不宜应用。 2．充池 充池时须充分混匀标本。避免断续充液在计数板中产生气泡、充液不足、液体外溢、充液后移动盖玻片等，均会使细胞分布不均匀，影响结果准确性。 3．白细胞的校正 血性脑脊液中的白细胞必须校正后才有价值，校正方法是分别计数血液红细胞、白细胞数和脑脊液细胞总数、白细胞数，扣除因出血而带进脑脊液的白细胞数。 4．涂片染色分类 细胞涂片时，为了使细胞容易粘在玻片上，可取沉淀的细胞悬液2滴，加血清1滴，混匀后涂片。 5．结果报告 （1）当肉眼能看到混浊的标本时，细胞数至少300×106/L以上；但脑脊液存在大量细菌、真菌等时，也可出现混浊。 （2）细胞分类计数时，如发现较多的皱缩或肿胀等异常红细胞，应如实报告，以协助鉴别陈旧性出血或新鲜出血；如发现内皮细胞或异常细胞，必须用巴氏染色或HE染色查找肿瘤细胞。 （3）新型隐球菌与白细胞、红细胞的区别：红细胞加乙酸后即溶解，白细胞和新型隐球菌均不溶解，新型隐球菌加优质墨汁染色后可见不着色的荚膜。 * *