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　　突变型与野生型TNF论文 【关键词】 ,肿瘤 Apoptosis of tumor cells induced by mutant and an mutant type 471 rhTNFα (mt 471rhTNFα) echanism induced by mt 471rhTNFα. METHODS: The apoptosis of ZR751 cells, a breast cancer cell line, induced by mt 471rhTNFα or etry techniques. The activation profiles of nuclear factor NFκB in ZR751 cells untreated and treated by mt 471rhTNFα or echanism induced by mt 471rhTNFα. RESULTS: The results from 20 g/L agarose gel electrophoresis of genomic DNA indicated that ZR751 cells treated by mt 471rhTNFα provided a typical apoptotic ladder pattern of DNA fragmentation, etry shot 471rhTNFα treated group t 471rhTNFα held a strong apoptosisinducible ability. The results of DNAbinding activity of NFκB shot 471rhTNFα t 471rhTNFα or t 471rhTNFα is superior to that of ay be that NFκB activation is inhibited in tumor cells treated t 471rhTNFα. 【Keys; mutant type 471rhTNFα; t 471rhTNFα）与野生型rhTNFα（t 471rhTNFα诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用机制进行初步研究. 方法： 以乳腺癌细胞系ZR751细胞为靶细胞，应用基因组DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞技术分析mt 471rhTNFα与t 471rhTNFα或t 471rhTNFα处理组的ZR751细胞基因组DNA呈现明显的ladder状分布，t 471rhTNFα诱导的细胞凋亡峰面积高于t 471rhTNFα处理组（P=0.002）. 结论： mt 471rhTNFα诱导肿瘤细胞凋亡的能力明显优于t 471rhTNFα诱导凋亡能力增强的主要原因之一. 【关键词】 肿瘤；突变型471rhTNFα；野生型rhTNFα； NFκB；细胞凋亡 0引言 人肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha, TNFα），主要由巨噬细胞产生，是具有多种生物学活性的细胞因子. mt 471rhTNFα是删除t 471rhTNFα重组蛋白的基础上［2-4］，进行新的研究，为mt 471rhTNFα的临床前研究提供实验依据. 1材料和方法 1.1材料 两种基因工程蛋白在大肠杆菌DH5α中进行表达，初步检测具有良好的生物学活性. 乳腺癌细胞系（ZR751）为本室保存. 细胞培养基RPMI1640系GIBCO BRL产品，FCS购自杭州四季青生物技术公司. Trans AMTM NFκB p65 Kit由晶美生物工程有限公司提供. 胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒由碧云天生物技术研究所提供. 1.2方法 1.2.1确定mt 471rhTNFα与和260 nm下的A值，确定蛋白的浓度；另取10 μL加等体积2×蛋白电泳载样液，行150 g/L SDSPAGE凝胶电泳，BackMan光密度扫描仪进行薄层扫描，以确定目的蛋白的含量. 1.2.2两型rhTNFα诱导细胞凋亡复苏ZR751细胞，传代培养至对数生长期，胰蛋白酶消化，Hanks液终止消化，收集细胞，并调整细胞数至2×108/L. 将细胞分为3组，即ZR751对照组、t 471rhTNFα处理组. 培养基中放线菌素D的终浓度为0.5 μg/L，样品终浓度为0.1 mg/L，于加药后12 h收集细胞. 将细胞分为两部分，一部分用于20 g/L琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA，另一部分用于流式细胞分析，以PBS洗涤细胞，RNase降解RNA, 700 mL/L乙醇固定，待用. 检测时，PBS洗涤以弃除700 mL/L乙醇，空干，碘化丙啶（PI）避光染色15 min以上. PBS洗涤后，将细胞重新悬于1 mL PBS中，