端粒酶及其在肺癌诊断中的应用进展论文.docVIP

　　端粒酶及其在肺癌诊断中的应用进展论文 端粒-端粒酶假说是新近提出的肿瘤形成的新理论。端粒是真核细胞染色体末端的具有保持染色体的稳定功能的DNA-蛋白复合体，端粒酶是一种RNA依赖性的DNA聚合酶，端粒酶的激活使端粒长度得以稳定，细胞获得无限增殖能力，成为永性细胞，而获得永生性是细胞恶变的关键步骤。近年的研究表明测定肺癌各种标本的端粒酶活性不仅有助于肺癌的诊断，还可用于肺癌的恶性程度、病理分期及预后的判断。端粒酶有望成为有价值的肺癌诊断的标记物。 端粒（telomere）是真核细胞线形染色体末端的DNA序列，其生物学功能是保持染色体的稳定。端粒DNA是由端粒酶（telomerase）以逆转录方式合成的。端粒长度缩短及端粒酶活化是细胞获得永生和癌症发生的重要因素。因此.freelmortal cells），而获得永生性是细胞恶变的关键步骤。端粒酶的激活究竟是通过何种机制使细胞获得永生的呢？当抑癌基因p53和Rb发生突变或癌基因如Ha-ras激活，或细胞受到肿瘤病毒/病毒蛋白（如HPV、E6/E7、E1A/E1B、SV40T抗原和EB病毒）作用时，细胞可越过第一致死期（M1）继续分分裂，端粒长度继续缩短，最终进入第二致死期（M2）。目前对于如何越过M2期的机制知之甚少，但此阶段与端粒酶活性的表达密切相关。体外实验证明SV40T抗原、EB病毒、E6/E7以及突变的p53转染后的初级细胞可以延长寿命，培养一段时期后，大部份获得永生，继续生长。已发现E6能直接诱发死亡前细胞的低水平的端粒酶活性；突变型p53转染人乳腺上皮细胞，可以激活其端粒酶而获得永生；B淋巴细胞用EB病毒转染后可以稳定缩短的端粒和表达端粒酶活性5，6。从端粒-端粒酶假说可以看出，端粒酶对肿瘤研究有两方面的意义：一是端粒酶可能是恶性肿瘤的标记物，可用于诊断；二是它与肿瘤的生成的增殖有关，端粒酶可能成为肿瘤治疗的靶点。 最近有些研究对肿瘤形成的端粒-端粒酶理论提出了挑战。有学者通过基因操作破坏培养的癌细胞系端粒酶功能，发现一些癌细胞却具有正常甚至较长的端粒7。基因敲除（knock out）去掉端粒酶活性的种系鼠，仍能正常生活和生育，并能发生癌变8。提示真核细胞可能通过端粒酶旁路途径维持端粒的DNA复制。由此看来，细胞的永生化以及癌变的形成以端粒酶途径为主（85%~95%恶性肿瘤端粒酶活性阳性），也存在非端粒酶途径。 端粒酶活性的检测 以往检测端粒酶活性的方法繁琐，组织需求量大，所得信号弱。1994年Kim等9报道了以PCR为基础的端粒重复扩增法（telmeric erpeat amplification protocol,TRAP），以端粒酶合成引物作为模板用于扩增，大大改进了以往的测定方法。由于该法简单、敏感性高，有力地推动了端粒酶表达的研究。尽管测定端粒酶活性的扩增方法直接且应用相对容易，但是人们仍很关心各个实验室之间的差异。最近不少学者10，11对TRAP法进行了改进，包括设立内对照（internal standard），可以达到半定量或定量测定水平，并可以检测可能存在于某些组织提取物中的扩增抑制剂。此外Gelmini等12］报道了一种新的改良的快速定量非同位素法，该法使用敏感的DNA的荧光PicoGreen染料，通过测量在端炷酶反应和PCR扩增中产生的双链DNA含量而对端粒酶含量进行定量测定，是测定端粒酶较精确、快速的方法。目前可对大多数病理标本（包括脱落细胞、针吸标本、体腔积液和手术切除标本等）进行端粒酶活性测定，还有学者报道了原位TRAP法，可对细胞内端粒酶活性进行定位测定13。 大多数正常体细胞不表达端粒酶活性，但胚系细胞以及小肠的腺腔都能检测到端粒酶活性，正常的白细胞也表达低水平的端粒酶活性，而正常的睾丸和卵巢组织却表达高水平的端粒酶活性，且源于苗勒氏管上皮的宫颈、子宫内膜以及输卵管也能检测到端粒酶活性。另外，半数的肝炎组织以及绝大多数肝硬化组织中也能检测出弱阳性的端粒酶活性14-16。Feng等17克隆了人类端类酶RNA，发现生殖细胞和肿瘤细胞表达的hTR较正常体细胞和端粒酶阳性组织高得多。端粒酶活性大多数常见的癌症，如前列腺、乳房、结房、结肠、肺和肝等癌症均可测得，其阳性率为85%～95%4。 端粒酶活性测定在肺癌诊断中的应用 肺癌手术标本端粒酶活性测定肺癌手术标本不受取材的限制，能较客观地反映肺癌组织端粒酶的活性情况。Hiyama等18用TRAP法测定了136例原发性肺癌的手术切除标本癌组织端粒酶活性，其阳性率80.1%(109/136),而正常邻近组织标本的端粒酶活性阳性率仅为4.4%（3/68）。小细胞肺癌端粒酶活性均为阳性（11/11），非小细胞肺癌的端粒酶活性呈高水平见于有肺癌转移破坏者。Albanell等19