端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞凋亡的影响论文.docVIP

　　端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞凋亡的影响论文 石梅，易军,凌瑞，宫卫东，付莉 【关键词】 甲状腺肿瘤；,寡核苷酸类,,反义；,端粒酶逆转录酶 Effect of antisense oligonucleotides encoding telomerase reverse transcriptase on thyroid carcinoma cell apoptosis 【Abstract】 AIM: To investigate the effect of antisense oligonucleotides (ASODN) encoding telomerase reverse transcriptase (TERT) mRNA on thyroid carcinoma (TC) cell apoptosis. METHODS: The ASODN and sense oligonucleotides (SODN) encoding TERT RNA on TC cell apoptosis ission electron microscope, Hoechest 33258 staining and floetry. RESULTS: Transmission electron microscope shoanifestations of TC cells; Hoechest 33258 staining shober of apoptotic cells from 52±16 to 178±32; floetry revealed that the apoptosis rates of TC cells treated by 5 μmol/L ASODN, SODN, or nothing entary to TERT mRNA at some concentration can sequencespecifically enhance TC cell apoptosis. 【Keys; oligonucleotides, antisense; telomerase reverse transcriptase 【摘要】 目的：探讨端粒酶逆转录酶(TERT)的反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌(TC)细胞凋亡的影响. 方法：体外培养TC细胞，TERT ASODN和正义寡核苷酸(SODN)分别作用于体外培养的TC细胞,采用透射电镜，Hoechest荧光染色，流式细胞仪等方法分析ASODN TERT对TC细胞凋亡的影响. 结果：透射电镜示ASODN可诱导TC出现典型的细胞凋亡形态，Hoechest荧光染色显示ASODN可使TC凋亡数目增多从52±16上升到178±32.freelol/L ASODN处理组,.freelerase reverse transcriptase, TERT）作为端粒酶蛋白主要组分，被称为端粒酶活性作用的限速因子［1］. 端粒酶通常在除永生细胞系外的正常组织无活性表达，而TERT则可在正常组织中表达［2］. 研究表明，甲状腺肿瘤作为最常见的内分泌肿瘤，其组织端粒酶阳性表达率20％～100％，与癌细胞分化程度有关，分化程度较好的乳头状癌阳性率相对较低(20％～67％)［3-7］，分化较差的滤泡状癌(67％～100％)与未分化癌(67％～100％)比较则较高［5］. 鉴于TERT在甲状腺癌(thyroid carcinoma, TC)中的重要作用,我们采用反义核酸治疗技术,通过封闭TERT基因表达而抑制TC细胞增殖,旨在为防治TC探索基因治疗的新途径. 1 材料和方法 1.1材料 手术选取人TC组织,立置pH 7.4 的Hanks液中彻底清洗，并剪成1 mm3左右小块，继续清洗至悬浮液澄清，500 r/min离心5 min，弃上清. 将处理后的甲状腺组织块置三角烧杯中，加入10倍体积的0.5 nkat/L的胶原酶，置50 mL/L CO2孵箱中37℃消化2～3 h，用200目不锈钢纱网过滤于离心管中，500 r/min离心5 min，沉淀即为TC细胞. 加入含200 mL/L新生牛血清的改良Eagle培养液(Dubleccos modified Eagle medium, DMEM),吹打制成细胞悬液;最后以细胞密度5×107/L接种于培养瓶中,置37℃,饱和湿度,50 mL/L CO2的培养箱中培养和传代. 采用与以TERT mRNA翻译启始密码子为起点的一段序列，与该序列互补的为反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides, ASODN)，与该序列相同的为正义寡核苷酸(sense oligonucleotides, SODN). ASODN序列为: