组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用论文.docVIP

　　组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用论文 侯一峰，周艳春，郑晓璇，王海燕，傅意玲，方泽曼，何韶衡 【关键词】 组胺；肺/细胞学；上皮细胞；Toll样受体 【Abstract】 AIM: To investigate the upregulatory effect of histamine on Tolllike receptor (TLR) expression in pulmonary epithelia cells. METHODS: TLR1TLR10 mRNA expressions ined by RTPCR in resting A549 cells, and by realtime quantitive PCR in the cells folloulation ine at various concentrations and at various periods of time. Furthermore, the upregulatory effect of histamine on TLR3 ined by floetry. RESULTS: TLR1TLR10 mRNA ine significantly enhanced TLR3 expression at both mRNA and protein levels in a concentration and timedependent manner. This effect of histamine ine in A549 cells, ine can enhance the sensitivity of pulmonary epithelium to virus infection ine, lung/cytology; epithelial cells, Tolllike receptor 【摘要】 目的： 观察组胺对肺上皮细胞中Toll样受体（TLR）表达的影响. 方法： 体外培养人肺上皮细胞株A549，用RTPCR和实时定量PCR检测静息状态或组胺作用下的A549细胞中TLR1～TLR10 mRNA的变化.freelRNA的组成型表达，组胺对TLR3 mRNA和蛋白的上调作用具有时间和剂量依赖性，并且H1受体阻断剂可抑制组胺对TLR3的上调作用. 结论： 组胺可上调肺上皮细胞中TLR3的表达，提示当呼吸道存在变态反应性病变时，增多的组胺可能会增加肺上皮细胞对病毒感染的敏感性. 【关键词】 组胺；肺/细胞学；上皮细胞；Toll样受体 呼吸道病毒感染是支气管哮喘急性发作的一个重要诱因［1］，而有关哮喘急性发作时呼吸道对病原菌感染的敏感性及其机制目前尚不清楚. Toll样受体（Toll likereceptor, TLR）是一类在天然免疫识别中具有重要作用的模式识别受体，目前在人体内至少已发现TLR家族中的10个成员(TLR1～TLR10). TLR广泛表达于各类组织细胞中，且许多炎性介质可影响TLR的表达［2］. 组胺是一种在支气管哮喘中发挥重要作用的介质，有研究显示：组胺可上调血管内皮细胞中TLR2和TLR4的表达［3］. 本研究旨在通过观察组胺对肺上皮细胞中TLR表达的影响，探讨哮喘急性发作与呼吸道感染之间的关系. 1材料和方法 1.1材料人肺上皮细胞株A549购自美国ATCC(American Type Culture Collection)，胎牛血清、DMEM培养基购自Hyclone公司. TRIzol RNA提取试剂、ProofStart DNA聚合酶和Quanti Tet TM SYBR Green PCR Kit购自Invitrogen公司,RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶均购自Promega公司. 人TLR1～TLR10及βactin的PCR引物由上海生工生物工程公司合成. PCR产物回收试剂盒购自上海生工生物工程公司. FITC小鼠抗人TLR3 mAb（IgG1，40C1285）购自Imgenex公司， FITC小鼠IgG1同型抗体购自Chemican International公司. 组胺、盐酸苯海拉明购自Sigma公司. 1.2方法 1.2.1细胞培养A549细胞用含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养基,于37℃, 50 mL/L CO2的培养箱中培养, 每2～3 d 传代1次,所有试验均使用对数期细胞. 1.2.2RTPCR检测A549细胞在静息状态下TLR1～TLR10 mRNA的表达当在25 cm2培养瓶中的A549细胞达到80%～90%以上的融合状态时,改用不含血清的DMEM继续培养12 h. 在去除培养瓶中的DMEM后，按Trizol试剂盒说明书的步骤提取总RNA. 按MMLV