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磷酸果糖激酶研究进展 杨益坤 生命科学学院 S摘要：磷酸果糖激酶掌握着糖酵解开始的钥匙，是糖酵解中最重要的控制点。糖酵解速度主要取决于磷酸果糖激酶，它是个限速酶，其受多个途径调控：受ADP别构激活、ATP别构抑制；受柠檬酸、脂肪酸别构抑制；受果糖-2,6-二磷酸的调控；受H+抑制。生物体对磷酸果糖激酶的调控十分精细。对于磷酸果糖激酶的研究和应用主要在于对于糖尿病的治疗，磷酸果糖激酶的变构效应的研究，磷酸果糖激酶在糖酵解中的地位等等。本文就磷酸果糖激酶的研究进展进行综述。 关键词：磷酸果糖激酶 别构激活 别构抑制 柠檬酸结合位点 乳酸 糖尿病 地位 一．磷酸果糖激酶简介 名称：磷酸果糖激酶（fructose-1,6-bisphosphate） 磷酸果糖激酶1（Phosphofructokinase-1；PFK-1）是一种糖酵解作用里一种重要的酶，是一种由4个次单位组成的异位（allosteric）酵素，可受多种活化剂与抑制剂调控。糖酵解（glycolysis）是指在细胞质中将葡萄糖分解成为丙酮酸的过程，期间每分解一分子葡萄糖产生两分子丙酮酸以及两分子ATP。属于呼吸作用的第一个阶段，随后根据有氧与否将丙酮酸进行柠檬酸循环或发酵。在糖解作用里，PFK-1是负责将果糖-6-磷酸与ATP转变成为果糖-1,6-双磷酸与ADP。 糖酵解过程中，6-磷酸果糖生成1，6-二磷酸果糖( Fructosel，6bisphosphate，F-1，6-BP)，催化此反应的酶是6-磷酸果糖激酶1(6-phosphofructokinase1，PFK1)，这是糖酵解途径的第二次磷酸化反应，需要ATP与Mg2+参与，ΔG0=-14.2KJ/mol，反应不可逆。6-磷酸果糖激酶1是糖酵解过程的主要限速酶，是糖酵解过程中的主要调节点。至此，糖酵解完成了代谢的第一个阶段。 催化反应：果糖-6-磷酸+ATP→果糖-1,6-二磷酸+ADP 辅助因子：Mg2+ 催化机制： 镁离子将ATP外侧的两个磷酸基团作用，使磷原子更容易接受孤对电子的亲和进攻，使两个磷原子之间的氧桥所共用的电子对向氧原子一方转移，ATP的磷酸集团有利于氧桥断裂，并与果糖-6-磷酸分子结合，生成果糖-1,6-二磷酸。 立体结构： 每个PFK单体可以分为两个结构域，1和2。它们的空间位置可以用坐标系表示，结构域1从氨基酸的末端开始，包括五个折叠区域和五个螺旋区域。一个蛋白质单体在两个结构域中反复折叠。两个结构域自身都紧密装配，相互之间接触比较松散，形成一个深的裂缝。PFK的四个亚基中的每一个亚基都与其他两个亚基紧密接触，与第三个亚基的接触比较松散。每两个亚基形成一个超结构，而这样一个超结构与PFK的整体结构非常相似，因此，PFK在发展过程中保持了较为稳定的空间构象。 二．别构激活与别构抑制 变构酶是体内一些代谢物可以与某些酶分子活性中心以外的某一部位可逆地结合，使酶发生变构并改变其催化活性，这种调节方式叫变构调节。受变构调节的酶叫变构酶。根据对反应速度的影响分为变构激活剂、变构抑制剂。变构酶常由多亚基构成，包括催化亚基和调节亚基。有多个亚基的酶存在协同应。 ATP既可以作为反应底物又可以作为变构抑制剂，其原因在于：此酶有二个ATP结合位点，一个是与作为底物的ATP结合位点，另一个是与作为变构抑制剂的ATP结合位点，两个位点对ATP的亲和力不同，ATP与底物的ATP结合位点亲和力高，与变构抑制剂的ATP结合位点亲和力低。这样，当细胞内ATP不足时，ATP主要作为反应底物，保证酶促反应进行；当细胞内ATP较多时，ATP作为变构抑制剂，可降低6-磷酸果糖激酶1的催化活力。柠檬酸、脂肪酸就是通过加强ATP的抑制效应来抑制磷酸果糖激酶的活性，从而使糖酵解过程减慢。 ATP水解掉一个磷酸之后形成ADP，ADP再水解释放一个磷酸之后形成AMP。因为1,6二磷酸果糖是6磷酸果糖激酶1的产物又是激活剂，相当于产物能加快自己的生成，所以叫正反馈。首先，6-磷酸果糖激酶-1是一个四聚体，它有2个结合ATP的位点，一是活性中心内的催化部位，ATP作为底物结合；另一个是活性中心以外的与变构效应剂结合的部位，与ATP的亲和力较低。6-磷酸果糖激酶-1有多种变构激活剂，2，6-二磷酸果糖是最强的是因为2，6-二磷酸果糖在生理浓度范围（u mol水平）内就可以发挥效应。2，6-二磷酸果糖的作用是与AMP一起取消ATP、柠檬酸对6-磷酸果糖激酶-1的变构抑制作用。 三．磷酸果糖激酶中柠檬酸结合位点的进化 磷酸果糖激酶是依靠复杂方式来控制糖酵解，变构调节是调节催化作用的一种手段。对原核生物和真核生物的PFK进行序列分析表明，磷酸果糖激酶在两种不同的物种内的分歧是通过副本的变化和原核生物基因序列的变化引起的。