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菌种保藏方法及重要保藏机构简述 楼骏 陈令会 钱佳颖 陈真真 （浙江大学宁波理工学院 07生物技术 浙江宁波 315100） 【摘要】本文简述了菌种的保藏方法并介绍了国内外重要菌种保藏机构，并比较了各菌种保藏方法的优缺点。 【关键词】 菌种 保藏 保藏机构 菌种是国家的重要资源，是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产更离不开菌种。所以，菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。菌种保藏是指保藏机构依法以适当的方式收集、检定、编目、储存菌种或样本,维持其活性和生物学特性,并向合法从事病原微生物相关实验活动的单位提供菌种或样本的活动。保藏机构是指由卫生部指定的,按照规定接收、检定、集中储存与管理菌种或样本,并能向合法从事病原微生物实验活动的单位提供菌种或样本的非营利性机构。 1．几种常用的菌种保藏方法： 低温斜面试管保藏法 穿刺保藏法 液体试管保藏法 液体石蜡斜面保藏法 无菌蒸馏水保藏法 液氮罐超低温保藏法 主要措施 低温 低温，避氧 低温，避氧 低温，阻氧 低温，阻氧 超低温，保护剂 常用菌种 各大类 细菌，酵母菌 各大类 各大类* 各大类 各大类 培养基 按不同细菌的营养要求制备 按不同细菌的营养要求制备 按不同细菌的营养要求制备 按不同细菌的营养要求制备 按不同细菌的营养要求制备 麦芽汁琼脂斜面 保护剂 无 无 无 无 无 10%甘油或二甲基亚砜 保藏温度 4℃ 4℃ 4℃ 4℃ 4℃ -150℃~ -196℃ 保藏期 1~6月 1~12月 1~12月 1~2年 4年 15年 优点 操作简单 ,使用方便 ,不需特殊设备 穿刺法可保藏细菌2年之久 存活率高 变异少 简单易行保藏时间长能较好保持发酵活性 较斜面保存操作简便可减少翻管次数 存活率高，稳定性强，保藏时间长， 缺点 容易变异 污染杂菌的机会较多 操作程序较麻烦，需一定设备条件 直立存放，占空间大，不便携带 必须定期向贮罐补充液氮来保持其温度 真空冷冻干燥保藏法 砂土管保藏法 生理盐水保藏法 甘油冷冻保存法 主要措施 干燥，低温，无氧，保护剂 干燥，无营养 干燥，低温 低温，保护剂 常用菌种 各大类 产孢子的微生物 各大类 不产孢子或芽孢的微生物 培养基 按不同细菌的营养要求制备 按不同细菌的营养要求制备 按不同细菌的营养要求制备 按不同细菌的营养要求制备 保护剂 可选择血清、脱脂牛奶和海藻糖等 无 无 无 保藏温度 5~7℃ 4~6℃ -80℃ 保藏期 5~15年 1~10年 16月 约10年 优点 存活率高 变异少 方法简便，设备简单，适用于产孢子和有芽 孢的菌种保藏 操作简便, 不需特殊设备, 适合于液体深层培养菌株的保存 缺点 但操作程序较麻烦 需一定设备条件 在真空干燥过程中，机械力容易造成孢子的死亡， * 对石油发酵微生物不适宜 2．重要的保藏机构： 2.1国内主要菌种保藏机构及简介 国内主要菌种保藏机构名称 简介 中国农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)—1980 中国国家级农业微生物菌种保藏管理专门机构。农业菌种中心设有液氮菌种保藏库、冷冻干燥菌种保藏库、矿油斜面菌种保藏库。编入中国农业菌种目录（2001 年第二版）的库藏菌种有 2490 株，包括：细菌、放线菌、丝状真菌、酵母菌和大型真菌（主要是食用菌），共166个属510种（亚种或变种）。 中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)—1979 我国唯一的国家级工业微生物菌种资源保藏管理中心，保藏各种工业微生物菌种资源包括：细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌和大型真菌，共67个属251种，近3000株，库藏备份80000余支。 中国典型培养物保藏中心(CCTCC) 保藏的微生物包括细菌、放线菌、酵母菌、真菌、单细胞藻类、人和动物细胞系、转基因细胞、杂交瘤、原生动物，地衣，植物组织培养、植物种子、动植物病毒、噬菌体、质粒和基因文库等各类微生物（生物材料/菌种）。 中国兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)—1979 主要采用超低温冻结和真空冷冻干燥保藏法，长期保藏细菌、病毒、虫种、细胞系等各类微生物菌种。到目前为止，收集保藏的菌种达230余种(群)、3000余株。20多年来，中国兽医微生物菌种保藏管理中心为我国科研院所、高等院校及兽医生物制品的生产企业，提供了6万多株各类兽医微生物菌种. 中国林业微生物菌种保藏管理中心(CFCC)—1985 中心保藏有各类林业微生物菌株10700余株，包括苏云金杆菌模式菌株等细菌、食用菌等大型真菌、林木病原菌、菌根菌、病虫生防菌、木腐菌、病毒和植原体类等，分属于392个属954个种（亚种或变种）。 中国科学院武汉病毒研究