结合恒温环形核酸增幅法与萤光标示引子区别野外猪瘟病毒株与.PDFVIP

台灣獸醫誌 Taiwan Vet J 34 (2): 106-115, 2008 結合恆溫環形核酸增幅法與螢光標示引子區別野外豬瘟病毒株與 兔化豬瘟疫苗株 1 ， 2 鄧明中 1 ， 2 林育如 3 宣詩玲 T 李敏旭 1 黃天祥 1 黃金城 *3 簡茂盛 1 行政院農業委員會家畜衛生試驗所 2 國立中興大學獸醫學研究所 3 國立中興大學獸醫病理生物學研究所 (收稿日期: 97 年 5 月 5 日。接受日期: 97 年 6 月 11 日) J商要 台灣使用兔化豬瘟疫苗進行豬瘟防疫，但由於兔化豬瘟疫苗株與野外毒株無法有效地以血清學或病毒分離的 方式進行鑑別，因此建立快速而敏成的區別診斷方法對於豬瘟防疫是非常重要的一環。恆溫環形核酸增幅法由於所需 設備簡便且操作容易，目前已開發完成快速偵測豬瘟病毒核酸的方法，但此法若需進 步應用於區別診斷，則必須增 設引子及進行雙重反應等，對於臨床應用容易徒增勞力與引起交叉污染。我們結合特異性螢光標示引子﹒ LUX 引子， 配合快速敏戚的 RT-LAMP 反應，藉由定量 PCR 反應儀偵測特異性螢光訊號，可同時於單一反應管中達到快速區別 診斷豬瘟野外毒與疫苗株的目的。實驗結果顯示此項新技術之偵測極限範圍分別為 10°6 TCID50 (野外株)與 1010 日(疫苗株 TCID ) ，遠較 般常用於區別診斷之鐵克曼探針法來的方便、快速且敏戚，此成功開發之新方法對於日後 5 應用於豬瘟疫情防疫將有很大的幫助。[鄧明中、林育如、宣詩玲、李敏旭、黃天祥、黃金城、*筒茂盛。光標示引子 區別野外豬瘟病毒株與兔化豬瘟疫苗株。台灣獸醫誌 34 (2): 106-115, 2008 0 *聯絡人TEL: 04-2284 0368 FAX: 04-2285 21 師， E-mai l: mschien@dragon.nchu.edu.tw] 益亨訝:宿虛府萃， jj重克星探針，友轉錄恆溫環:rt按犀 ~j/1.蝠法 TAO C 、 Ems 、 E1 與 E2) 及七個非結構蛋白 (NP弋 NS2， 緒 E NS3 , NS4A , NS4B , NS5A，與 NS5B) [10， 2月。過去 豬瘟乃台灣豬隻最重要之惡性傳染病，一旦疫 利用豬瘟病毒5 端非轉譯區及E2 與NS5B 蛋白核 情爆發常導致嚴重之經濟損失 [20] 。豬瘟病毒與牛 酸片段的序列比對及親源分析，可將目前世界上之 病毒性下兩病毒 (Bovine viral diarrhea virus) 及羊先 豬瘟病毒區分為三種不同的基因型 (genotypes) 天性髓質形成不全病毒(Border disease virus) 同屬 [之間，分別為 group 1 、 2 及 3 彼此間相似度約 只有84.5% 不同基因型內又可細分為數個基因亞 於黃熱病毒科(Flaviviridae) 中的瘟疫病毒屬(Pes­ tivirus) ， 這三者的基因結構相似，且彼此間的抗體 型 (subtypes) ，這樣的特性對於追蹤疫情有非常大 有交叉中和作用 [2月。豬瘟病毒是一個小且具有封