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组织S-腺苷甲硫氨酸(SAM或AdoMet)酶连续循环比色法定量检测试剂盒组织S-腺苷甲硫氨酸(SAM或AdoMet)酶连续循环比色法定量检测试剂腺苷同型半胱氨酸核苷酶醌亚胺S-腺苷甲硫氨酸S-腺苷甲硫氨酸S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine;SAM或AdoMet)是参与甲基转移的辅酶,通过甲硫氨酸腺苷转移酶(methionine adenosyltransferase)催化腺苷三磷酸(adenosine triphosphate;ATP)和甲硫氨酸(methionine)结合而成C15H23N6O5S。作为供体,参与转甲基(transmethylation)、转硫(transsulfuration和转氨丙基transamino propylation)代谢。S-腺苷甲硫氨酸S-腺苷甲硫氨酸S-腺苷甲硫氨酸与抑郁症、痴呆dementia)、空泡性脊髓病vacuolar myelopathy)、维生素B12缺乏症(vitamin B12 deficiency发生有关。S-腺苷甲硫氨酸通过M.SssI;42KD)把甲基基团转移到底物分子poly[dI-C) d(I-C)]上生成S腺苷同型半胱氨酸,进而快速被腺苷同型半胱氨酸核苷酶分解为S-核糖同型半胱氨酸和腺嘌呤,腺嘌呤Adenine deaminase)产生次黄嘌呤,通过黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase)催化,生成过氧化氢,然后借助过氧化酶(peroxidase)的作用,与对羟基苯甲酸hydroxybenzoic acid)和氨基安替比林4-aminoantipyrine)反应,形成有色醌亚胺(quinoneimine),通过其吸收峰值的变化(510nm波长),来定量分析S-腺苷甲硫氨酸的含量。其反应系统为:
M.SssI
poly[dI-C) d(I-C)] + S-adenosylmethionine → methyl poly[d(I-C) d(I-C)] + S-adenosylhomocysteine
AdoHcy nucleosidase
S-adenosylhomocysteine → adenine + S-ribosylhomocysteine
Adenine deaminase
adenine → hypoxanthine
xanthine oxidase
hypoxanthine + H2O + O2 → urate + H2O2
peroxidase
2H2O2 + p-hydroxybenzoic acid + 4-aminoantipyrine → quinoneimine + 4H2O
产品内容
清理液(Reagent A) 60毫升
裂解液(Reagent B) 10毫升
转化液(Reagent C) 250微升
缓冲液(Reagent D) 3毫升
底物液(Reagent E) 250微升
反应液(Reagent F) 250微升
阴性液(Reagent G) 250微升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里; 底物液(Reagent E)避免光照;有效保证6月
15毫升锥形离心管恒温培养箱或水槽:用于反应孵育
比色皿或96孔板:用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪:用于比色分析
样品准备
手术取出动物组织,并秤重以确定组织重量
(选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管
(选择步骤)加入3毫清理液(Reagent A)清洗1次
移入到一个液氮冻存管
即刻放进液氮罐过夜
次日从液氮罐里取出,即刻(最快速度)用研磨棒碾碎组织成粉末状(注意:切莫使组织冻融)
放进一个15毫升锥形离心管
加入预冷的500微升 裂解液(Reagent B)
转移到预冷的1.5毫升离心管
强力涡旋震荡30秒,充分混匀
置于冰槽里孵育30分钟,期间每10分钟强力涡旋震荡30秒(注意:如需暂时停止,放进-70℃冰箱里储存备用)
放进4℃微型台式离心机离心5分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-30030.1
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