实验用牛第3部分：遗传质量控制-北京市质量技术监督局.DOCVIP

前 言 DB11/X XXX《实验用牛地方标准》分为个部分： ——第1部分：微生物学等级及监测 ——第2部分：寄生虫学等级及监测 ——第3部分：遗传质量控制 ——第4部分：病理诊断规范 ——第5部分：配合饲料 ——第6部分：环境条件 本部分为DB11/X XXX的第部分，为推荐性条款。 本部分附录A规范性附录。本部分由北京市科学技术委员会提出。 本部分由北京市实验动物管理办公室归口。 本部分由北京市实验动物管理办公室组织实施。 本部分起草单位：。 本部分主要起草人：、、、。 实验用牛 第部分：遗传质量控制 范围 DB11/X XXX的本部分规定了实验用牛的、繁殖和遗传质量。 本标准适用于实验用牛的遗传质量控制。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 3157GB 19166 中国西门塔尔牛 NY/T 1446 种公牛饲养管理技术规程 NY/T 2662 标准化养殖场 奶牛 NY/T 14 高产奶牛饲养管理规范 NY/T 1339 肉牛育肥良好管理规范 NY/T1673 畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程 术语和定义 下列术语和定义适用于DB11/X XXX的本部分。 实验用牛 experimental 经人工饲育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的。 起源于德国西北部和荷兰北部接壤处的大型乳用牛，毛色以黑白花为主，间或有红白花或黄白花。 3.3 DNA 条形码 DNA barcode 是指生物体内能够代表该物种、有足够变异、易扩增且相对较短的线粒体DNA片段，利用该保守片段能够对物种进行快速准确鉴定。 实验用牛的 4.1 形态特征 实验用牛 4.2 外观检查 依据品种特征进行外观检查，如荷斯坦牛，毛色为黑白相间，花片分明，额部多有白斑，腹底部四肢腰关节以下及尾端呈白色，有角，多数由两侧向前向内弯曲，角体蜡色，角尖黑色。体型可分为大、中、小三个类型。 中国荷斯坦牛应符合GB/T 3157要求，中国西门塔尔牛应符合GB 19166要求。 不符合品种特征或形态特征的不得用于实验。 4.3 遗传一致性检查 利用DNA条形码技术对实验牛进行一致性检查，检测方法和结果判定见附录A。 实验用牛的繁殖 .1 实验用奶牛的饲养繁殖 按照NY/T 2662-2014 标准化养殖场 奶牛，NY/T 1446 种公牛饲养管理技术规程，以及NY/T 14 高产奶牛饲养管理规范进行饲养繁殖。 5.2 实验用肉牛繁殖 NY/T 1446 种公牛饲养管理技术规程，NY/T 1339 肉牛育肥良好管理规范进行饲养繁殖。 实验用的遗传质量监测 6.1 实验用牛的遗传质量 实验用牛必须符合以下要求： --外貌符合品种特征； --谱系记录完整； --繁殖方法科学； --遗传一致性检查合格； --群体遗传结构符合品种特征。 6.2实验用牛遗传质量检测方法及实施 6.2.1 通过DNA条形码技术对实验牛种属特性进行确认。当实验用牛体貌特征与品种特征不符时，应及时按附录A进行遗传一致性检查。 6.2.2 按照NY/T1673-2008畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程进行评价。 6.2.3 检测时间间隔 实验用牛生产群每年至少进行一次遗传质量检测。 附 录 A （规范性附录） 实验用的检测方法 检测的原理 采集实验用的血液或耳组织，提取基因组DNA。对特定的进行PCR扩增，通过遗传分析仪基因大小，确定。 仪器设备 A.2.1　常压电泳仪 A.2.2　4℃、－20℃冰箱 A.2.3　低温高速离心机 A.2.4　水浴锅 A.2.5　分析天平（精确度：万分之一克） A.2.6　pH计 A.2.7　紫外分光光度仪 A.2.8　PCR仪 A.2.9　A.3.0　遗传分析仪 检测方法 A.3.1 样本的采集 A.3.1.1　耳静脉或前腔静脉采血2ml，加等量的血液裂解液。 A.3.1.2　采集大于1g的耳组织样，放入75%乙醇保存。 A.3.2　基因组DNA的提取 用常规方法提取基因组DNA。 A.3.　PCR扩增 A.3..1　PCR扩增的体系 扩增反应体系：总体系为25μl，含10×PCR buffer（含镁离子）3μl，4×dNTP 3μl，上下 游引物(10 pmol/μL) 各1μL , Taq 酶1U：1μL ,50 ng～100 ng 基因组DNA：1μL , 纯水补齐体积 。 PCR 反应程序：95℃预变性