生物单分子研究-北京大学单分子与纳米生物学实验室.PDFVIP

生物单分子研究 刘闯 生物单分子研究是指对单个生物分子的观察，构象变化，动力学，单分子之 间的相互作用以及对单个分子操纵的研究。 通常人们都认为分子生物学所研究的过程就是由分子组成的过程。因此研 究结果也就代表了每个分子的行为。实际上几乎所有分子生物学实验都是用大量 分子在一定时间内完成的。因此从这些实验所得出的结果只代表这一测量时间内 大量分子的平均行为。即使由完全相同分子组成的均匀体系，分子本身由于不断 运动，不是处于静态而是动态，而测量的参数具有涨落现象；对于非均匀体系， 由于不同分子的分布不同，在一定时间内的行为更不相同。生物体系一般来说都 是不均匀体系，只有某些特殊条件下才能看作是均匀而处于静态的体系。例如对 于稀溶液中小分子的核磁共振谱线测定，由于测定时间远大于小分子的翻滚时 间，可以近似地认为是一个均匀系统，并看作静态。除此以外，有涨落的均匀系 统以及非均匀系统都不能得到真实的单个分子在一定时间内的动态行为。而这种 动态变化正是人们研究大分子结构与功能关系最重要的基础。 单分子研究取得了令人瞩目的成就，观察到了ATP酶动力蛋白的作用机制： － F1 ATP酶是一个转动蛋白，它由γ亚基及α，β亚基组成，其中γ 亚单位是一个马 达，能发动亚毫秒级的步进式转动，而且呈现1/3 对称，即三次转后回到原位置， 因此认为每转一步是120 度在简单暗视野里激光照明条件下，把一个荧光分子或 － 金颗粒标记γ 亚单位上，用超快速照相机摄影，可以记录下来每隔120 度的跳跃。 在低浓度的ATP条件下，120 度又由90 度加30 度两步组成；用光阱拉住一段DNA 分子两端的力学实验，可观察到DNA分子受扭转，拉伸时，它的承受力到何种 程度。力小时，DNA分子的行为就像一个弹簧，用力大一点，螺旋会有一点解 旋；采用低浓度的病毒，CY5 和通常的荧光显微镜及CCD照相机，研究人员观 察到了单个病毒颗粒进入细胞膜及核的过程；运用TRFRM细胞膜上G蛋白α亚单 位与βγ亚单位的解离及结合，细胞内Ras及Rap1 蛋白的结合。这些研究充分体现 了单分子研究的优点，即能够排除系综效应，得到单个分子运动的形态学和动力 1 学信息 。 生物单分子研究发展到今天，仍是一门方兴未艾的学科，仍有很大的发展空 间。总结起来可以有很大发展空间的有以下两个方面，一个是技术方面，一个是 研究方向方面，而这两者又是相互促进的。 我们首先来看技术方面，在许多单分子研究方面的综述文献里面，大家普遍 都是这么一个思路，就是先介绍研究单分子研究的技术，再介绍单分子研究的内 容。可见在单分子研究中技术的力量是很强大的，无法想象当年如果没有STM 的问世，那么我们就不会“看到”单原子和单分子形貌以及操纵单个原子以及分 子。没有技术的实现，再好的实验思路和研究内容也只是纸上谈兵。技术方面， 仪器的空间分辨率和时间分辨率需要进一步的提高。技术发展的终极目的是能够 在超微空间水平和超微时间水平上实时观察活细胞，观察到细胞内每个分子活动 的细节。并且能够随心所欲的对分子进行操纵。但就这样的目的来言，还有很长 的路要走。SPM系列显微镜能够达到毕竟高静态空间分辨水平，STM利用隧道电 流与距离的敏感关系对表面进行成像，在横向分辨率上打到10－10 m ，纵向分辨 率上达到10－11 m ，AFM利用针尖表面间的作用力与距离的敏感关系对表面进行 成像，分辨率能够达到 10－10 m 。这样的分辨率对于单分子以及单细胞的研究来 说是一个很高的分辨率了，但SPM家族的时间分辨水平远远不够，扫描一个样品 要经过较长的时间，这样的话就没有办法实现实时的观察。而且这一类技术是对 分子表面进行成像的，无法研究到分子的内部。且对样品损伤较大，很难实现活 细胞的检测。而用可见光技术能够实现快速，无损，实时的检测，光子对受研究 分子的扰动最轻微，因此在活细胞实时检测中有着重要的作用。至今，科学家们 已发展了很多用光学手段进行单分子检测，成像及光谱分析的技术，比TRIFM， SNOM，共聚焦显微镜，单分子光谱分析（FCS ），荧光标记技术等，但可见光 的空间分辨率受