突破衍射极限——探索纳米世界的超分辨显微技术.PDFVIP

·化学篇· 专 论 突破衍射极限——探索纳米世界的超分辨显微技术 李德增，陈 波 (华东师范大学化学系，上海 200241) 摘要：介绍了2014年诺贝尔化学奖，并以此为背景围绕着如何突破衍射极限提高分辨率这一核心问题，通过衍射极限产生的原 因、突破的途径及新型显微技术发展的历程及特点等几个方面展开阐述，以期更好地认识新型光学显微技术在探索纳米世界时的作 用和意义。 关键词：诺贝尔化学奖；衍射极限；瑞利判据；超分辨率；荧光显微技术 文章编号：1005–6629(2015)1–0012–05 中图分类号：G633.8 文献标识码：B 1 引言 区域进行了多次“绘图”，每次仅仅让很少量的分散分 2014年10月8日，2014年度诺贝尔化学奖揭晓， 子发光。将这些图像叠加起来产生了密集的纳米尺寸 美国科学家埃里克·白兹格（Eric Betzig）、威廉姆·艾 超分辨率图像。2006年，Eric Betzig首次采用了这一技 [1] 斯科·莫尔纳尔（William E. Moerner）和德国科学家斯 术 。 特凡·W·赫尔（Stefan W. Hell）三人获奖，以表彰他们 今天，超分辨纳米显微技术已被世界广泛采用，新 在超分辨率荧光显微技术领域取得的成就。 知识源源不断地产生，造福着人类。利用超高分辨率显 长期以来，光学显微镜的分辨率被认为是有极限 微镜，可以让科学家们在分子水平上对活体细胞进行 的，它不可能超过二分之一个光波长度，对于可见光波 研究，如观察活细胞内生物大分子与细胞器微小结构 长而言，约200纳米。1873年德国物理学家阿贝（E. 以及细胞功能如何在分子水平上进行表达及编码，对 Abbe）指出衍射极限是传统光学显微镜存在最大分辨 于理解生命过程和疾病发生机理具有重要意义。 率的物理限制。然而，在荧光分子的帮助下，今年诺贝 本文围绕着如何突破分辨率极限这一核心问题， 尔奖化学奖的几位获得者巧妙地绕开了这种限制，并突 通过分辨率极限产生的原因、突破的途径及新型显微 破了这一极限。他们划时代的贡献将传统光学显微镜技 技术发展的历程及特点等几个方面展开阐述，以期更好 术带进了纳米领域，使光学显微镜步入了纳米时代。 地理解新型光学显微技术在探索纳米世界时的作用和 根据纳米荧光显微技术，科学家实现了活体细胞 意义。 中单个分子通路的可视化。他们能够观察到分子是如 2 衍射极限与瑞利判据 何在大脑神经细胞之间生成神经突触；还可以追踪帕 传统（透镜式、传输光）光学显微镜的有效放大倍 金森病、阿尔兹海默症和亨廷顿症患者体内相关蛋白 率是有限的，它取决于成像的衍射极限。光在传播过程 的累积情况等等。然而科学家在最小分子水平上对活 中，遇到障碍物或小孔时，光将偏离直线传播的途径而 体细胞细节进行研究时，却受到了限制。由于今年三位 绕到障碍物后面传播，即光的衍射现象。衍射效应使障 诺奖得主的贡献，我们可以利用突破衍射极限的光学 碍物后空间的光强重新分布，使得一切几何影界失去了 显微镜对纳米世界一探究竟。 明锐的边缘。衍射极限是指一个理想物点经光学系统 这次获奖的是两项独立的技术。第一项是Stefan 成像，由于衍射的限制，系统所成的像不再是理想的几 Hell于2000年研制的受激发射损耗（STED）显微技术。 何点像，而是得到形成明暗相间的衍射图样（夫朗和费 此项技术采用了两束激光。一束负责激发荧光分子使 衍射像）。许多成像光学仪器就是一个低通滤波器，物 其发光，另一束则负责抵消大部分荧光，只留下一块纳 平面包含从低频到高频的信息，透镜口径限制了高频信 米大小体积的荧光区域。用该技术仔细扫描样本，得 息通