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淫羊藿炮制前后有效成分含量的比较 一、 实验内容 比较淫羊藿在炮制前后其主要成分淫羊藿苷含量的多少 二、目的要求 1、掌握用高效液相色谱法定量分析炮制前后中药成分的含量 2、 熟悉高效液相仪测定含量的基本操作 3、了解中药炮制的意义 三、 实验原理 中药的化学成分比较复杂，而化学成分是药物发挥临床的物质基础。中药在炮制后，对其有效成分的煎出有一定的影响，从而会影响到临床疗效。研究中药炮制前后的化学成分的变化，对中药炮制的作用和原理有重要意义。测定含量的方法有多种，高效液相法测定含量操作简单并且准确率高而作为多种化合物含量的测定方法。实验时可以根据对照品和样品在高效液相仪得出的色谱图作比较（如峰高，半峰宽，峰面积等）从而计算出所测物质的含量。 四、实验仪器及试剂 分析天平（万分之一） 高效液相仪 容量瓶（100mL 25mL各2只） 量液管（1mL) 胶头滴管 烧杯 玻璃棒 70%乙醇（分析纯） 淫羊藿生品 淫羊藿炮制品 内标物（分析纯）  五、实验方法 （一）溶液的制备 1、 样品溶液的制备： 紧密秤取淫羊藿生品及炮制品各约2g，分别加入编号为“生” “制”字样的100mL容量瓶中，精密加入70%乙醇50mL至刻度线处，密塞，静置过夜，过滤，收集滤液备用。 2、对照品溶液的制备：精密秤取取淫羊藿苷约2mg，置于25mL的容量瓶中，加70%的乙醇至刻度线处，摇匀，备用。 3、内标物溶液的制备：精密秤取内标物约 mg，置于25mL的容量瓶中，加70%的乙醇至刻度线处，摇匀，备用。 （二）淫羊藿苷的含量测定（内标法） 1、校正因子的测定：精密量取对照品和内标物的溶液各 mL，混合配成测定的校正因子的对照液，量取一定量的溶液，注入到高效液相仪中，在得到的色谱图中分别测定对照品和内标物的峰面积或峰高，并记录。计算f值。 2、待测物中淫羊藿苷浓度的测定：分别精密量取和内标物溶液各 mL，混合，再分别量取一定量的混合液注入到高效液相仪中，在得到的色谱图中分别测定对照品和内标物的峰面积或峰高，并记录。根据所得数据计算出待测物中淫羊藿苷的浓度Cx。 （三）数据的处理 表一 物质 峰面积（A) 质量 加乙醇后的体积 对照品 25mL 内标物 25mL 生品 50mL 炮制品 50mL （四） 计算公式： 校正因子（f)= （As为标物的峰高或峰面积 Ar为对照品的峰高或峰面积 Cs为内标物的浓度 Cr为对照品的浓度） 浓度（Cx)= （Ax为试样的峰高或峰面积 As为内标物的峰高或峰面积 Cx为试样品的浓度 Cs为内标物的浓度 f为校正因子） 药材中有效成分的含量（A%)= (Cx为试样品的浓度 V0为50mL m0为试样品的质量） 六、实验结果 七、实验结果讨论及思考 八、实验注意事项 （一）内标物选择的要求 1）内标物应是试样中不存在的纯物质 必须能完全溶于试样中，并与试样各组分的色谱峰能完全分离。 3）加入内标物的量应接近与被测组分。 4）色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰位置相近或几个被测物组分的色谱峰之间。 （二）内标法的优缺点 有点：测定结果比较准确，可以通过测定内标物及被测组分的峰面积的相对值进行计算，因而能在一定程度上消除操作条件的变化引起的误差。 缺点：操作程序比较麻烦，每次分析时内标物和试样都要准确称量，有时寻找合适的内标物也比较困难。 (三）外标法的优缺点 有点：操作简便。 缺点：进样量的要求十分准确，要严格控制在与标准品相同的条件下进行，否则造成分析误差，得不到准确结果。 九 、参考文献： 《中国药典》2010版（电子版） 《分析化学》（第六版 李发美主编） 《中药炮制学实验指导》（贵阳中医学院版 2011） 百度百科