高效液相色谱法在药检中应用.docVIP

高效液相色谱法在药检中应用【摘要】目的 探讨高效液相色谱法在检测刺五加甙B含量中的应用。方法 以Kromasil ODS为色谱柱（4.6mm×250mm），以浓度0.1%磷酸水溶液/乙腈（80/20）为流动相，波长为230nm，进行刺五加甙B含量的高效液相色谱法检测。结果 刺五加甙B的线性关系良好（2.98μg/mL～44.31μg/mL），检测有很好的重现性，其RSD为1.9%，回收率为99.6%，r为0.9997。结论 高效液相色谱法在检测刺五加甙B的含量上准确有效 【关键词】高效液相色谱法 刺五加 药品检测 中图分类号：R927 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2012）1-343-02 高效液相色谱法（high perfornance liquid chromatography）是被纳入我国药典的主要色谱分析法其固定相均匀规则，分辨率高，传质阻抗小，多用于药品检验，尤其是其对中药类成分的定性和定量检测被广泛应用于中药领域[1]，本文采用高效液相色谱法对刺五加的主要活性成分刺五加甙B的含量进行了检测，现报告如下： 1 仪器与材料 SPD10A型紫外检测仪，四元泵，高速离心机，电子秤量分析天平（上海市化学仪器厂），HP1100型HPLC色谱仪 用于检测的刺五加产地为吉林省长白山，其对照品刺五加甙B由中国生物药品制品检定所提供，产品编号为111498-201004 以乙腈为色谱纯（江苏化学制剂厂），水为重蒸水，甲醇（山东省禹王药物制剂有限公司），0.1%磷酸水溶液为分析纯（中国药科大学制药厂） 2 方法与结果 2.1 HPLC色谱条件 以Kromasil ODS为色谱柱（4.6mm×250mm），以浓度0.1%磷酸水溶液/乙腈（80/20）为流动相，波长为230nm，在25℃，流速为0.8mL/min的条件下进行HPLC检测 2.2 配制待测样品溶液 将待测的刺五加（吉林长白山）洗净，取其茎部和根部组织，切成长约1cm的薄皮，置入干燥箱行高温烘干（75℃），待失去水分后碾成粉末状，使用电子分析天平精确秤量茎部和根部的样品各0.5g，加浓度为50%的甲醇溶液20mL于100mL烧杯，连同样品一起混合，经1h回流提取，取得样品滤液由50%浓度甲醇进行溶解转移，并用25mL容量瓶进行定容，取适量滤液进行高速离心机离心（12000r/min）,用时为5min，待静置后，其上清液即为待测样品溶液 2.3 配制对照溶液 使用电子分析天平精确秤量刺五加甙B（中国生物药品制品检定所）5.65mg，加浓度为50%甲醇溶液于5mL容量瓶中，与对照品混合溶解进行定容，制成对照储备溶液，取储备溶液1mL于25mL容量瓶进行稀释，加浓度为50%甲醇溶液至刻度，得到刺五加甙B浓度为44.31μg/mL的对照品溶液，放入冰箱5℃储存待用 2.4 HPLC检测 2.4.1 HPLC色谱图分析 在波长为230nm，柱温为25℃，流速为0.8mL/min的条件下进行HPLC检测，可见刺五加甙B对照品的保留时间为11.7min，并在色谱图上表现出很好的与其他成分进行了分离 2.4.2 HPLC线性关系分析 取制备好的刺五加甙B对照品溶液，分别稀释配制成浓度为44.31μg/mL，35.55μg/mL， 26.78μg/mL，14.50μg/mL，4.28μg/mL，2.98μg/mL，对HPLC色谱仪加样20μL进行检测，记录不同浓度对照品溶液色谱图，以峰值面积为纵轴，样品浓度为横轴，制得PHLC标准曲线图，分析其线性关系，计算刺五加甙B的线性方程为y=62.337x+2.4316，浓度范围值为2.98μg/mL～44.31μg/mL ，r为0.9997 2.4.3 测试加样回收率 用电子分析天平称取制备的待测刺五加粉末0.5g，称取5次后，均混入对照品溶液，使用HPLC色谱仪进行检测，测得刺五加甙B的5次测样的回收率平均值为99.6%，测得其RSD为1.9% 2.4.4 HPLC检测刺五加甙B稳定性 采用HPLC色谱仪加样测试待测样品液，浓度为2.98μg/mL，加样量每次为20μL，共加样5次，每次间隔2h，测算样品液的峰值面积和刺五加甙B的RSD，经HPLC测得其RSD为1.7%，在8h内样品具有很好的稳定性 2.4.5 HPLC测定的重现性 电子分析天平称量样品粉末0.5g，称样5次后，再次制备待测样品溶液，重复测定刺五加甙B的RSD值，实验测得其样品的RSD值为1.8%，证明HPLC检测样品含量有很好的重现性 2.5 待测样品的刺五加甙B测定 采用HPLC对制成的待测根部样品和茎部样品进行刺五加甙B含量的测定，共进