表面活性剂Tween80和Tween60对毛头鬼伞胞外多糖产量的影响.pdfVIP

2007年11月 绵阳师范学院学报 Nov．，2007 第26卷 第11期 Journal of Mianyang Normal Univers Vo1．26 No．11 表面活性剂Tween80和Tween60对 毛头鬼伞胞外多糖产量的影响 李林辉 ，李天东 ，刘婷 (1．西华师范大学生命科学学院，四川南充 637002；2．绵阳师范学院生命科学与技术学院，四川绵阳 621000) 摘 要：比较了两种表面活性剂Tween 80和Tween 60对毛头鬼伞茵丝体培养过程中胞外多糖释放的影响。 实验结果表明：Tween 80和Tween 60均能促进细胞释放胞外多糖，而以Tween 80较好；在发酵培养基中加入不同 浓度的Tween 80时，对毛头鬼伞茵丝体胞外多糖释放的影响不同，加入0．05％Tween 80时，胞外多糖的产量最高， 达到31．226g／L，而对照组的胞外多糖产量仅为21．437g／L。胞外多糖的产量比对照组提高了46％。 关键词：表面活性剂；Tween 80；Tween 60；毛头鬼伞；多糖 中图分类号：Q949．329．81 文献标识码：A 文章编号：1672-612x(2007)l1-0074-03 多糖可充当免役增强剂和免疫调节剂，其组分还有抗菌活性，并且已经被用作人体因癌症、放射、化学处 理引起的免疫抑制和免疫低下的治疗-lI3】。毛头鬼伞(Coprinus eomatus)又名鸡腿菇，因其形似鸡腿而得名， 隶属于伞菌目、鬼伞科、鬼伞属。有研究结果表明，从毛头鬼伞子实体中提取的粗多糖同样具有较高的免疫活 性和抗肿瘤活性-4 J，因此，毛头鬼伞多糖的研究备受关注。但大多数的研究局限于营养因素、生长因子、环境 因子对毛头鬼伞多糖产量的影响 J，还未见表面活性剂对毛头鬼伞胞外多糖产量影响的报道。 表面活性剂是一类分子中含有亲水基和亲油基，即双亲结构的有机化合物。这种特殊结构使表面活 性剂表现出多种多样的实用功能，如乳化、增溶、润湿、吸附、渗透、分散、消泡、增稠、润滑等，广泛应用于工 业领域。由于表面活性剂在发酵体系中，不仅能增加传氧速率，而且能够改变细胞膜的通透性，利于毛头 鬼伞多糖向胞外分泌，表面活性剂已经在发酵产物生产中被广泛利用。因此，在毛头鬼伞菌丝体发酵过程 中，本研究采取添加适量表面活性剂Tween 80和Tween 60的方法，以达到大幅度提高毛头鬼伞胞外多糖 产生能力的目的。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 实验材料 毛头鬼伞由本院微生物实验室提供。 1．1．2 培养基 液体种子培养基：玉米粉2．0％、酵母膏1．0％、KH2PO40．20％、MgSO4·7H20 0．10％和VBl15 mg／L。 多糖生产培养基：玉米粉2．0％、酵母膏1．0％、KH2PO40．20％、MgSO4·7H20 0．10％和VB1 20mg／L。 1．2 方法 1．2．1 培养方法 种子制备：将25～26~C活化7d的新鲜试管种(PDA培养基)捣碎，按10％接种量加人到灭菌的液体种 子培养基，25~C，160 r／min培养4d。终止培养，捣碎菌丝球作为种子备用。 多糖发酵：在250ml三角瓶中，装入100ml多糖生产培养基，灭菌后，加人10ml捣碎的种子液，并加人 收稿日期：2007-08—17 基金项目t西华师范大学博士基金项目(2005B-41) 作者简介：李林辉(1965一 )，男，副教授，博士，主要研究方向：真菌发育与遗传。 第11期 李林辉等：表面活性剂Tween80和Tween60对毛头鬼伞胞外多糖产量的影响 ·75· 一 定浓度的表面活性剂，25oC，160r／min培养7d。 1．2．2 茵丝体生物量及胞外多糖含量分析 菌丝体生物量的测定：用4O目尼龙布过滤发酵物，分离得菌丝体和发酵液。将获得的菌丝体用蒸馏水 冲洗3—4次后8O℃烘干至恒重，称量即得菌丝体的生物量。 胞外多糖含量测定：将获得的发酵液置低温析残余出淀粉，用滤纸过滤得上清液。取上清液lOml，用 Sevag法脱蛋白[9 3，再定容为lOⅡll，为测定多糖的样品。胞外多糖含量的测定采用硫酸一蒽