2016上海交通大学遗传学实验1果蝇技术与杂交.pptVIP

实验一 果蝇实验技术与果蝇杂交实验 xinkuifang@sjtu.edu.cn 摩尔根的研究 科学史上最著名的一只昆虫： 1910年5月诞生了白眼雄性果蝇 1 终于同一只正常的红眼雌蝇交配以后才死去 2 子一代全是红眼 3 子二代中的红、白果蝇的比例正好是3：1 4 子二代的白眼果蝇全是雄性 5 小翅基因一样位于X染色体 子二代出现了一些白眼正常翅和红眼小翅的类型 6 建立了遗传学的第三定律——连锁交换定律 7 创立的基因学说 8 奠定了染色体遗传机制理论 实现了遗传学上的第一次理论综合。推动了细胞学的发展，并促使生物学研究从细胞水平向分子水平过渡，以及遗传学向生物学其它学科的渗透，为生物学实现新的大综合奠定了基础。 一、实验目的 果蝇是进行遗传学研究重要的模式生物。 1 观察认识果蝇性状。 2 了解果蝇生活史。 3 掌握果蝇的饲养方法。 4 学习杂交实验原理与方法，探索果蝇若干性状遗传规律。 实验材料 果蝇（fruit fly）： 双翅目（Diptera）昆虫*， 果蝇属（genus Drosophila），约有2500个种。 遗传学实验材料： 黑腹果蝇 Drosophila melanogaster 。 用果蝇作为实验材料有以下优点： 饲养容易。在常温下，以玉米粉等作饲料就可以生长，繁殖。 生长迅速。10-12天左右就可完成一个世代， 25℃培养, 卵1-2天，幼虫4-5天，蛹4-5天，成虫可活26-33天 。 繁殖力强。 每个受精的雌蝇可产卵400-500个，因此在短时间内就可获得大量的子代，便于遗传学分析。 果蝇的完全变态发育： 卵（embryo）、幼虫（instar larva）、蛹（pupa）、成虫（adult） 染色体数少。只有4对。 唾腺染色体制作容易。横纹清晰，是细胞学观察的好材料。 突变性状多。而且多数是形态突变，便于观察。 果蝇性别及突变形状的鉴别 认识：红眼与白眼(w)，长翅与小翅(m), 焦刚毛(sn)与直刚毛,雄性与雌性， 性梳和平衡棍。 野生型：红眼、长翅、直刚毛 突变型：白眼、小翅、焦刚毛 果蝇形态 雄蝇第一对足跗节 直刚毛 焦刚毛 果蝇实验技术 饲养与保种 果蝇以酵母菌为主要食料，凡能发酵的基质都可做为果蝇饲料。实验室里主要用玉米。 原种每2-4周换一次培养基，看到幼虫后就将成虫赶去。各品系之间避免杂交。 处女蝇的挑选及杂交 将雌雄果蝇放在一起培养，雌蝇有贮精囊，一次交配即可获得大量的精子，供多次排卵时受精。如需不同品系之间进行杂交，雌性母本则需要收集处女蝇。 准备好亲本培养管后，每天中午12：00观察记录果蝇的情况，在观察到发黑的蛹时，将成蝇全部赶去，24小时内出来的雌蝇基本上是处女蝇。 将处女蝇放入准备好新的培养管，累计到3-4只后，放入雄蝇 杂交管的观察与记录 将所需品系的雌蝇与雄蝇放在一起培养，如果需要观察F1代的性状，7-8天后，需要倒掉亲本，避免F1代雌蝇与父本杂交，影响结果。 果蝇管标记（纸盖） 亲本管：P（+/-），组别：1（上午）-组数，2-（下午）-组数，接种时间； 杂交管：F1/F2，组别：1（上午）-组数，2-（下午）-组数，接种或杂交时间； 工具的使用 培养瓶：有培养基，纸盖与瓶口的密封， 毛笔：分突变型和野生型，勿混用 麻醉瓶：干燥、空的培养瓶，突变型和野生型勿混用，用棉塞 文具盒：中的工具保持完整 果蝇实验技术 果蝇实验技术 果蝇的麻醉与观察 将果蝇收集到麻醉瓶中，在塞子上滴加4-5滴乙醚，可将果蝇暂时麻醉，用毛笔进行杂交、观察等处理； 若要彻底处死果蝇，可多加乙醚，长时间麻醉，果蝇翅膀外展45度，说明死亡。 观察中如有果蝇活动的迹象，可在放果蝇的滤纸上滴少许乙醚，用培养皿盖紧，重新麻醉 如果需要赶去整瓶的成蝇，可直接将果蝇倒入乙醇中处死。 将果蝇暂时麻醉或麻醉死后可在解剖镜下进行观察。 实验内容 观察培养管中果蝇的形态、及标记的类型和培养时间 用麻醉瓶麻醉后，放在滤纸上观察； 观察鉴别果蝇性状，每组综合各观察果蝇，制作果蝇形态类型表。 将观察过的果蝇用毛笔重新刷入培养瓶 注意培养瓶所标果蝇的种类；在果蝇苏醒前，将果蝇瓶倒放 性状类型 野生型 突变型基因符号 突变型 突变型基因符号 眼色 　 + 　 　 翅型 　 + 　 　 刚毛 　 + 　 果