葛根对成骨细胞OPG、RANKL mRNA 表达的影响论文.docVIP

　　葛根对成骨细胞OPG、RANKL mRNA 表达的影响论文 .freelRNA表达的影响，力求从细胞水平和分子水平对葛根抗骨质疏松的机制进行探讨，为葛根应用于临床防治骨质疏松提供有力的实验依据。方法 将(250±10)g的SD大鼠36只，随机分为两组：对照组灌服生理盐水，中药组灌服2g/ml的葛根10ml/kg·d，1日2次灌胃.freell细胞悬液，24h待细胞贴壁后加入实验因素，6天后用异硫氰酸胍一步法提取总RAN，然后用RT-PCR检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果 最后一次用药后2h采血的中药血清可明显上调成骨细胞OPGmRNA表达，且明显下调成骨细胞RANKL mRNA的表达。随血清添加量的增加，对成骨细胞OPG mRNA表达上调作用越强，对成骨细胞RANKL mRNA的表达无影响。结论 实验表明，葛根可能通过上调成骨细胞OPG mRNA的表达，下调成骨细胞RANKL mRNA的表达，抑制破骨细胞的产生和功能，为葛根防治骨质疏松提供了有力的实验依据。 【关键词】 葛根；成骨细胞；OPG；RANKL 【Abstract】 Objective To explore the effects of roots of kudzu vine on the mRNA expression of OPG and RANKL of osteoblasts using RT-PCR. To provide the experimental base for its preventing and treating the OP in clinic， it is urgent to explore the mechanism of roots of kudzu vine anti-osteoporosis in cell and molecular level.Methods 36 SD rats ly divided into tinistered orally edium sagittatum maxim（2g/ml）tl/kg body the femoral artery at one hour， tinistration of medicine. Primary rat osteoblasts neouse calvariae. The third passage osteoblasts l in 75ml culture flask， tent factors osteoblasts using guanidine， and mRNA expression of OPG and RANKL ined using RT-PCR.Results Serum of roots of kudzu vine can up-regulate mRNA expression of OPG of osteoblasts and doRNA expression of RANKL of osteoblasts.The effect of serum of medicine harvested at 2h after the last medicine administration is the most strong and the effect for OPG anner ，hoanner.Conclusion The experiment shoight inhibit the generate and function of osteoclast by up-regulating the mRNA expression of OPG and doRNA expression of RANKL. It has provided the experiment base for roots of kudzu vine preventing and treating the OP in clinic. 【Key RNA表达的影响，力求从细胞水平和分子水平对葛根抗骨质疏松的机制进行探讨，为葛根应用于临床防治骨质疏松提供有力的实验依据。 1 材料与方法 1.1 实验动物 出生24h内的SD大鼠，(250±10)g SD大鼠，由河北医科大学实验动物中心提供。 1.2 药物与试剂 葛根（购于保定市第三中心医院），DMEM培养基（GiBco），胰蛋白酶（GiBco），Ⅱ型胶原酶（Sigma），新生小牛血清（NCF）（北京鼎国生物试剂公司），RT-PCR试剂（北京赛百盛基因技术公司），PCR引物：OPG(gene bank：NM-012870) 北京赛百盛基因技术公司合成，上游引物：5′-CGAGTGATG